谢三平,陈吉相,李慧,徐婧,黄园园

1.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,武汉 430022;2.荆州市中心医院神经内科,湖北荆州 434020

携带人类GAD67基因真核表达载体的构建及转染骨髓基质细胞*

谢三平1,2,陈吉相1#,李慧1,徐婧1,黄园园1

1.华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,武汉 430022;2.荆州市中心医院神经内科,湖北荆州 434020

目的:构建携带人类谷氨酸脱羧酶67(GAD67)基因的真核表达载体pDC316-CMVEGFP-GAD67,并转染大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)。方法:利用基因重组技术,构建 pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体;利用脂质体将其转染通过贴壁方法分离培养出来的BMSCs,荧光显微镜下观察并经流式细胞仪检测其转染效率,免疫组化检测GAD67蛋白在BMSCs中的表达。结果:成功构建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体,转染BMSCs后荧光显微镜下观察可见绿色荧光细胞,流式细胞仪检测转染后48 h的转染效率为37.3%,免疫组化检测转染后48 h,BMSCs内GAD67蛋白呈阳性表达。结论:构建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体并成功转染BMSCs。

谷氨酸脱羧酶67;真核表达载体;转染;骨髓基质细胞

#【通讯作者】陈吉相,Tel:86-27-85726203,E-mail:cz283895@yahoo.cn

研究显示,癫痫的发生与神经元退行性变性引起的脑内兴奋性递质与抑制性递质系统功能失衡有密切联系。谷氨酸(glutam inic acid,GLU)和γ-氨基丁酸(gamma-am inobutyric acid,GABA)是调节脑内兴奋性与抑制性平衡最重要的2种递质,谷氨酸脱羧酶(g lu tamic acid decarboxylase,GAD)催化GLU脱羧反应生成GABA。GAD有GAD65和GAD67两种亚型,其中GAD67在调节GABA的生成和释放中起主要作用[1]。利用携带及表达GAD67基因的神经干细胞脑内移植治疗癫痫可能具有重要价值[2]。骨髓基质细胞(bonemarrow stromal cells,BMSCs)是骨髓内造血干细胞以外……