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肾透明细胞癌组织中组蛋白乙酰化酶hMOF的表达及其乙酰化位点的初步研究

2011-09-07芦志华王勇迟长亮唐宇哲蔡勇金景姬王春喜

中国医科大学学报 2011年9期
关键词:水平

芦志华,王勇,迟长亮,3,唐宇哲,3,蔡勇,金景姬,王春喜

(1.吉林大学第一医院泌尿外科,长春 13002;2.吉林省人民医院泌尿外科,长春 130021;3.吉林大学研究生院,长春 130012;4.吉林大学生命科学学院,长春 130012)

组蛋白乙酰化修饰在基因转录调控、DNA损伤修复及细胞周期调控等生物学过程中发挥重要作用。组蛋白乙酰化状态的异常与多种疾病有关[1]。组蛋白乙酰化修饰通常发生在H3、H4亚单位上,其中60%的H4呈单乙酰化状态,且多数发生在H4组蛋白N端第16位赖氨酸(K16),即H4K16Ac。目前已知hMOF基因调控H4K16的乙酰化,其缺失将可能导致整个基因组范围内的H4K16Ac减少。另有研究表明,在人体内hMOF的乙酰化位点可能并不仅仅局限于H4K16[2]。目前尚无hMOF基因在肾透明细胞癌(以下简称肾癌)组织中的表达情况及乙酰化位点的报道。本研究拟探讨肾组织中hMOF基因及蛋白的表达情况,及H4K5、K8、K16位点乙酰化水平与hMOF基因表达水平之间的关系,从而进一步明确肾癌的发病机制。

1 材料与方法

1.1 材料

选取我院2008-2010年肾透明细胞癌组织病理切片66例,并以癌旁正常肾组织为对照。汇总患者相关临床资料(年龄、性别、肿瘤最大径、Fuhrman分级、pT分期、局部复发、淋巴结及远处器官转移等)。所有患者均为原发性肾癌,术前均未行放、化疗及靶向药物治疗。收集近期我院行肾癌根治术的肾癌组织样本9例,其中Fuhrman分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各3例,并留取癌旁正常肾组织作为对照。收集样本后立即以液氮冻存。采用Biozol RNA试剂盒(Biomiga公司)1批次提取组织总RNA,用superRT cDNA试剂盒(CWbio公司)将其逆转录成cDNA,-20℃保存。

ABI PRISM 7300荧光实时定量 PCR(qRTPCR)仪 (Applied Biosystems,美国),SYBR Green Mix(ABgene,英国)。……

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