潘淑勇，刘玉峰，任立华，姚景春，王 成

(鲁南制药集团有限公司，山东 临沂 276006)

临床上盐酸柔红霉素主要用于治疗急性非淋巴细胞性白血病，对儿童白血病有良好的缓解作用。用途更广的是作为合成去甲氧柔红霉素、阿霉素和表柔比星的原料。盐酸柔红霉素及其结构类似物以其广谱、高效的优势难以被其他抗肿瘤药取代。柔红霉素、阿霉素和表柔比星已经作为医保药品惠及我国的癌症患者，但是高昂的生产成本使得药价居高不下。提高柔红霉素的发酵水平、降低生产成本能够从根本上降低药价，对于降低癌症病人的医疗负担和我国的医保费用支出具有非常重要的意义。

本研究应用基因组重排法提高柔红霉素的发酵水平。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 亲本:F－1:在不含柔红霉素的培养基中生长，发酵效价为 1000 mg·L－1，在含有 500 mg·L－1柔红霉素的培养基中不生长;BX－5:在含有500 mg·L－1柔红霉素的培养基中生长旺盛，但不产生柔红霉素。2种菌株保存在鲁南制药集团科研部。

1.1.2 融合培养基及试剂 TM缓冲液，亚硝基胍(NTG)，无水甲醇AR，生理盐水，25%PEG4000，YEME液体培养基，TSB液体培养基，10.3%蔗糖溶液，2 mg·mL－1溶菌酶溶液，P缓冲液，R5固体平板，500 mg·L－1盐酸柔红霉素水溶液。

1.1.3 色谱条件 高压液相色谱Agilent C18色谱柱(53 mm×7 mm，3 μm);流动相:15 mmol·L－1的磷酸二氢钾 － 乙腈(1∶1);柱温25 ℃;流速1.0 mL·min－1;检测波长:254 nm。

1.1.4 试验仪器 Agilent液相分析仪1100SERIES，日立离心机CF16RX，梅特勒分析天平AB204－S，梅特勒电子天平200 g，梅特勒pH计seven easy，SIM 超低温冰箱F8514，哈东联摇床HZQ－QX，上海博讯全自动电热蒸气压力灭菌器YXQ－LS－75SⅡ，苏州安泰生物安全柜BHC－1300ⅡA/B，天津中环电热恒温水浴锅双列四孔，广东医疗器械厂真菌培养箱LCP－250－MS。……