郑纪伟 韩斐斐 王 瑾 韩建国 丁志江

中国社会渐步入老龄化，牙体缺失情况越来越严重，随着经济水平的增长及对美观要求的提高，种植作为修复缺失牙的重要手段变得越来越重要。种植成功的关键在于形成良好的种植体-骨界面[1]，如何获得这种理想的种植体-骨界面结合方式，影响因素主要有种植体、成骨细胞功能和其他外在因素等。外源性细胞因子对成骨细胞的功能具有重要的调节作用，TGF-β1就是其中一类重要的多肽类生长因子。鉴于TGF-β1对于成骨细胞作用的复杂性和多样性，以及有关TGF-β1对接种于钛片表面的成骨细胞作用的报道相对较少，本研究采用体外实验的方法，探讨特定浓度的TGF-β1对钛表面成骨细胞的增殖、分化的影响。

1. 材料与方法

1.1 实验材料和主要仪器 MC3T3-E1成骨细胞系(ATCC中心，美国)；TGF-β1(Peprotech公司，英国)；GAPDH引物及其它引物均由上海生工合成(见表1)。

纯钛片(Strauman公司，瑞士)TA2，直径15mm，厚约1mm，使用喷砂机用TiO2均匀喷砂处理3min，10%盐酸处理1min，去离子水清洗，5%碳酸氢钠中和，去离子水清洗三次，高温高压消毒备用。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及钛片表面细胞接种 取出冻存的成骨细胞，置42℃水浴使其快速融化。转移至离心管，磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer saline，PBS)冲洗，DMEM完全培养液重悬。转移至培养瓶，加入含10%胎牛血清的完全DMEM培养液，置37℃，5%CO2培养箱中培养，待细胞长成单层后，倒掉瓶内的培养液，加少许消化液，静置5～10分钟。倒掉消化液，制成细胞悬液，送回二氧化碳培养箱培养。将处理好的钛片置于6孔培养板中，每孔六片，平铺板底。……