张家留,张 丰*,殷丽萍,于如同

(1.江苏省中西医结合医院,江苏南京 210028;2.徐州医学院附属医院）

胶质瘤是主要的颅内肿瘤之一,其预后不佳。探讨胶质瘤发生过程中增殖、侵袭的的分子病因学机制,以寻找相应的治疗靶点是临床和科研工作中的迫切需求[1]。黏着斑激酶(FAK）的激活,是肿瘤发生侵袭的重要机制,FAK通过增强整合素和生长因子介导的Ras-MAPK的通路活性,促进肿瘤细胞的转移。酪氨酸激酶Src是肿瘤早期出现的致癌性蛋白激酶,参与诸如细胞周期、增殖、细胞骨架形成、生长因子信号传递等诸多肿瘤生长相关机制[2,3]。Src与FAK关系密切,Src结合并激活FAK,而活化的FAK-Src复合物则通过底物磷酸化介导下游反应。抑癌基因PTEN能通过抑制黏着斑激酶(FAK）和酪氨酸激酶 Src的磷酸化,从而选择性Ras-MAPK通路[4,5]。但PTEN的泛素连接酶NEDD4-1(neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1）的过表达能够下调PTEN的功能,从而促使肿瘤发生和转移[6]。

对于Src蛋白在NEDD4-1介导的胶质瘤在侵袭性的作用,目前尚无临床报道。本实验拟采用RNA干扰技术(RNAi）,通过抑制Src在胶质瘤U251细胞系中的表达,探索其对下游信号分子蛋白的影响,进一步揭示Src在干扰胶质瘤细胞侵袭中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

本实验依托徐州医学院神经外科及神经生物学实验室(该实验室为SPF级重点实验室）。实验中的硬件及软件材料大部分由该实验室提供,其中实验中所需的U251细胞购自中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心）。所需的pcDNA3.1-NEDD4-1质粒由美国Memorial Sloan-Kettering肿瘤中心细胞生物学实验室提供。pGPU6/GFP/Neo-NEDD4-1质粒由本实验室构建、保存。……