加载机械振动对骨髓间质干细胞粘附和碱性磷酸酶活性的影响

2011-08-20黄岚峰邵国喜张延哲赵劲松

中国实验诊断学 2011年12期

关键词：振动

黄岚峰,邵国喜,张延哲,赵劲松

(吉林大学第二医院1.骨科;2.眼科,吉林长春 130041）

随着生物学和材料科学的发展,组织工程技术已被众所周知和越来越多地应用于再生医学领域,与此同时,机械工程的方法也比以前更多地与生命科学相结合。种子细胞以高活性生长粘附在的基质材料的表面是组织工程的研究中至关重要的问题,本研究的目的是研究间质干细胞在向成骨细胞分化过程中观察通过加在机械振动对MSCs粘附性能和碱性磷酸酶活性的影响,探讨一种促进种子细胞以高活性与基质材料粘附的方法。

1 材料与方法

1.1 细胞的来源和培养

大鼠Fischer344,7周龄,雌性,共4只作为本实验的细胞来源。大鼠通过过量的乙醚麻醉处死,然后在洁净操作台中取出双侧的股骨、胫骨和肱骨,在超净台中切除股骨松质骨的部分,用含10%胎牛血清(FBS）、1%抗生素(Antibiotics）的DMEM(Dulbecco'sModified Eagle Medium）培养液将骨髓腔的细胞冲洗至离心管中,骨髓细胞经离心(1 500 rpm）后在T-75培养瓶中进行原代培养,4日后首次更换培养液,然后每隔两日更换培养液同时去除未贴壁的细胞,1周左右待细胞长满单层后,用5ml PBS冲洗,0.25%Tripsin-0.02%EDTA 3 ml于37℃CO2孵箱中消化细胞约5分钟,显微镜观察细胞收缩、细胞间裂隙明显增大,用5 ml DMEM终止消化,并吹打细胞成单细胞悬液,离心后转移至另一试管中,以4.0×104/cm2的密度种植于6孔培养板中,培养液中加入10%FBS,1%Antibiotics,10-8M地塞米松(Dexamethasone）,80 μ g/ml 维生素 C(L-Ascorbic Acid）,以及10mM beta甘油磷酸钠(Naβ-glycerophosphate）进行成骨细胞活性诱导。