刘桂红 章龙珍 唐天友 刘美艳 赵丽

脑胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，约占全部颅内脑肿瘤的35% ～40%。目前，胶质瘤的治疗仍以手术、放疗为主。由于大多数胶质瘤呈浸润性生长，手术难以彻底切除，而且某些肿瘤生长于重要的脑功能区，多为手术禁区，使得放射治疗成为脑胶质瘤综合治疗中一个重要的辅助方法。但胶质瘤对射线较抗拒，加上正常脑组织耐受剂量的限制，导致脑胶质瘤放射治疗的总体疗效不理想。

肿瘤基因-放射治疗目的就是试图通过提高肿瘤的辐射敏感性的同时降低正常组织的辐射损伤开辟新的治疗途径与方法。研究发现Egr-1启动子可诱导辐射敏感性，而TNF相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL)能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常组织无损伤，因此若将两者共同构建表达调控体，就能很好地达到肿瘤基因-放射治疗的目的。因此本实验在以CMV作为启动子的腺病毒重组载体Ad-CMV-hTrail作为对照的基础上，研究Ad-Egr-hTrail单独及联合放射线对脑胶质瘤细胞的杀伤作用，为临床脑胶质瘤基因-放射治疗进一步研究提供实验基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒重组载体Ad-Egr-hTrail及Ad-CMV-hTrail为上海交通大学医学院生物化学教研室葛盛芳博士惠赠，U251脑胶质瘤细胞株购自中科院生物细胞学研究所。MTS检测试剂盒(Promega);DMEM培养基(GIBCO)。PCR反应试剂盒(Fermentas公司);100bp Marker(天为时代公司);引物序列由上海生物工程公司合成：

上游引物(P1)：5＇-GCTGCCTGGCTGACTTACA-3＇，下游引物 (P2)：5 ＇-TGGCTGGTCTAGACAGATTGC-3 ＇，扩 增 片 断为1037bp。

1.2 实验方法

1.2.1 重组腺病毒的扩增 、纯化和滴度测定 将携带Ad-Egr-hTrail的293包装细胞从-70℃冰箱取出，-70℃/37℃反复冻融3次，以裂解细胞，释放重组病毒。……