李洪波， 朱辛明， 宋玉国， 熊 英， 王 萍

病理状态下的血小板黏附、激活、聚集形成的动脉粥样硬化被认为是脑梗死(cerebral infaretion，CI)的重要致病因素之一。活化状态下的血小板膜糖蛋白CD41/CD61复合物能表达多种血小板受体功能，与纤维蛋白原、血管性血友病因子(vWF)、纤维连接蛋白、玻基结合素等粘连性蛋白结合形成异二聚体，在血小板聚集中起着关键作用。本实验采用病例-对照的方法，研究血小板膜糖蛋白CD41/CD61的基因多态性及其表达率，探讨血小板膜糖蛋白CD41/CD61与脑梗死的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

脑梗死组及对照组均来自吉林地区，汉族人。脑梗死组均为我院确诊的脑梗死首发住院患者115例，其中男64例，女51例，年龄36～77岁，平均63±11岁。符合1995年全国第四次脑血管病学术会议制定的脑梗死诊断标准，均经头颅CT或MR证实有相关责任病灶;排除既往脑出血、心肌梗死、冠心病、心脏瓣膜病、糖尿病等病史。对照组103例，均为同期门诊健康体检者，其中男59例，女44例，年龄33～79岁，平均61±10岁。

1.2 标本的采集

两组均于清晨空腹抽取静脉血2ml，所有受试者排除近3个月使用抑制血小板功能药物史。

1.3 CD41/CD61基因多态性分析

1.3.1 DNA 的制备

采取的静脉血标本EDTA-Na2抗凝，-40℃保存备用。根据《分子克隆实验指南》(第3版)中蛋白酶K法提取全血标本DNA，提取试剂盒(离心柱型)购自天根生化科技(北京)有限公司。

1.3.2 聚合酶链反应(PCR)

1.3.2.1 CD41 PCR 扩增 CD41的上游引物5’-CTC AAG GTA AGA GCT GGG TGG AAG AAAGAC-3’，下游引物 5’-CTC ACT ACG AGA ACT GGA TCC TGA AGC CTC-3’。PCR反应总体积为10μl，含 200μmol/L dNTP，上、下游引物各 0.3μl和1μl DNA 模板，0.04μlTaqDNA 酶，反应条件为 95℃预变性7min，按下列程序循环，变性94℃30s，退火58℃30s，引物延伸 72℃15s，共 35 个循环，最后72℃延伸7 min。……