廖维荣 张江南 唐城 郑茶凤 张永模

(1.复旦大学附属金山医院普外科,上海 200540;2.南昌大学第一附属医院普外一科,江西南昌 330006)

腹腔镜肝癌手术中,CO2气腹是否会增加肝癌细胞的侵袭能力以及是否由此促进肿瘤在腹腔内的种植和转移是腹腔镜外科医师尤为关注的问题。本研究应用体外模拟CO2气腹环境,观察不同气腹压力对肝癌细胞体外侵袭及黏附能力的影响。

1 资料与方法

1.1 细胞培养及分组 肝癌SMMC-7721细胞(取自江西省消化病研究所)常规培养于含10%小牛血清的RPMI1640中。依据模拟CO2气腹设置的不同压力分为5 mmHg、10 mmHg和 15 mmHg 3个实验组及对照组。各实验组分别在设置压力下的CO2气腹模型中持续孵育肝癌细胞2 h,然后置入与对照组相同的环境中继续培养,按培养0 h、36 h、72 h的不同时间点进行实验。对照组中的肝癌细胞始终置于37℃、5%CO2、95%相对湿度的细胞孵育箱中培养。

1.2 体外CO2气腹模型的建立 自制密闭有机玻璃容器,带有2个通气孔。全自动气腹机与通气孔相连,气腹机中CO2充入其中,排尽空气,通过气腹机调节容器内压力和气流量。

1.3 T ranswell法检测细胞体外侵袭能力 将不同分组处理的肝癌细胞消化、重悬,调整细胞浓度为4×105个/mL。分别取0.2 mL加入在经Matrigel包被的 T ranswell侵袭小室的上室中,下室加含10%小牛血清的RPMI1640条件培养基0.5 mL,每组细胞设3个Transwell小室,置入常规孵育箱中培养24 h,0.1%结晶紫染色,于100倍普通光学显微镜下观察穿透过滤膜至下室面的细胞数,计数5个视野,取均值。

1.4 细胞黏附试剂盒检测细胞体外黏附能力 将不同分组处理后的肝癌SMMC-7721细胞按继续培养不同的时间(0 h、36 h、72 h)的分别取出,用不含酶的细胞消化液消化、重悬,调整细胞浓度为1×105个/mL。……