赵勇 于雷 陈福来 陈杨 刘晓岭 宋纯

(1.哈尔滨医科大学附属第一医院普外一科,黑龙江哈尔滨 150001;2.黑龙江省医院外科;黑龙江哈尔滨 150001;3.黑龙江省哈尔滨市第一医院,黑龙江哈尔滨 150010)

糖尿病患者的患病率呈逐年递增的趋势。对于1型糖尿病及2型糖尿病终末期患者,胰腺移植治疗是比较理想的治疗方法[1],但由于这2种糖尿病患者大多合并多种并发症,其临床应用受到限制[2]。目前研究[3]证实,胰岛经体外培养后移植治疗糖尿病会更加安全、有效。本研究旨在探讨高压氧条件下微重力培养的高分子可降解聚乙醇酸支架-胰岛复合物移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。

1 资料与方法

1.1 移植前胰岛细胞培养

1.1.1 胰岛的切取、分离与纯化 SD大鼠(移植治疗的供体,体质量250～300 g,购于北京维通利华公司),雌雄不限。术前禁食12 h,腹腔内麻醉,进腹,将0.5 mg/mL胶原酶V溶液8～10 mL通过胆总管套管注入胰腺,待胰腺膨胀至粉红色后迅速摘取整个胰腺,冰浴中去除脂肪和淋巴组织,剪碎胰腺,移入消化瓶中消化振摇至呈细颗粒状,过滤、离心、洗涤,最终沉淀物为获得的胰岛,制成细胞悬液,待用。

1.1.2 细胞培养前支架的处理 聚羟基乙酸(polyglycolic acid,PGA,购于Synthecon公司)纤维网状支架为直径15 μ m的PGA纤维,网孔为100～150 μ m,空隙率为97%,厚度为1～2 mm。培养前将支架浸泡入75%乙醇溶液中30 min,冲洗3次,吹干,紫外灯照射1 h,放入10 mg/mL多聚赖氨酸(Poly-l-lysine,Sigma公司)中浸泡30 min,吹干,备用。

1.1.3 分组 本实验共分为3个组:(1)对照组(静止培养):胰岛细胞放入普通培养瓶中培养;(2)实验组1(微重力支架培养):胰……