朱鹭冰 高地 李明

(复旦大学附属中山医院皮肤科,上海 200032)

系统性硬化病(systemic scleroderma,SS)是以皮肤硬化和内脏器官纤维化为特征的结缔组织病,病因不明,预后不佳,目前缺乏特效的治疗药物[1]。成纤维细胞(fibroblast,Fb)合成异常增多是SS发病的重要因素。Fb在胶原合成功能上具有显著异质性,SS患者Fb中的部分克隆具有异常高胶原合成的特性,如仅以细胞系为研究对象,就难以对这部分具有异常高胶原合成能力的Fb克隆的特性进行针对性研究。施加干预因素后,也无法对胶原合成异质性克隆的改变进行准确的评价。故我们前期的研究[2]筛选出SS患者皮损和健康人皮肤具有不同胶原合成能力的Fb克隆,观察到SS高胶原合成Fb克隆的Ⅰ型、Ⅲ型前胶原 α 1链(COL1A1,COL3A1)基因在转录水平即被激活。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue grow th factor,CTGF)和干扰素-γ(interferon gamma,IFN-γ)是 3种重要的促/抗纤维化细胞因子,可调节SS患者和健康人FbⅠ型、Ⅲ型前胶原蛋白和mRNA表达,并且它们的调节作用多发生在转录水平[3-5]。但以往的研究多以Fb细胞系为靶细胞,未考虑干预前Fb本身胶原合成能力的异质性可能对实验结果产生不同的影响。因此,本研究以胶原合成异质性Fb克隆为靶细胞,细致研究上述细胞因子对SS患者FbⅠ型、Ⅲ型前胶原基因转录的调控作用。

1 资料与方法

1.1 主要试剂 胎牛血清、高糖DMEM培养基(奥地利PAA公司);胰蛋白酶(美国Sigma公司);pGL3-Enhancer Vector、pRL-SV40 Vector及双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司);Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司);重组人TGF-β1、人 CTGF 和人 IFN-γ(英国 Peprotech 公司);二喹啉甲酸蛋白定量检测试剂盒(上海生工公司)。……