霍双枝,施 萍,庞希宁

中国医科大学 1细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室 2附属第一医院全科医学教研室,沈阳 110001

皮肤作为一种特殊的器官,是机体免于脱水、损伤和感染的第一道防线,也是维持内环境稳定和阻止微生物、化学物质等侵入的屏障。人羊膜 (human amniotic membrane,HAM)是一种天然高分子生物材料,含胶原、糖蛋白、蛋白多糖等多种成分,能表达多种生长因子,有利于细胞的生长繁殖,促进上皮和新生血管形成,抑制炎症,促进组织修复。人羊膜间充质干细胞 (human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)具有高度自我更新能力,易在体外培养、扩增,遗传性状稳定,免疫原性低等特点,存在于羊膜基质中,在羊膜治疗皮肤创伤时是直接接触创面的细胞成分,但其在羊膜治疗皮肤创伤中发挥的作用尚不十分清楚。本研究观察了HAM负载hAMSCs对SD大鼠皮肤创面愈合的影响,初步探讨了羊膜治疗皮肤创伤的机制。

材料和方法

材料和试剂 雄性SD大鼠18只,体重200～240 g,购自中国医科大学动物部;包埋剂 (optimal cutting temperature compound,OCT)购自美国McCormick公司,SABC免疫组织化学试剂盒购自上海Maixin-Bio公司,角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)和血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,其他常规试剂购自沈阳化学试剂采购供应站。

羊膜的制备与负载 取健康剖宫产产妇的羊膜,其乙型肝炎5项、人类丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。在无菌超净台上用PBS液冲洗羊膜上的血迹,钝性分离羊膜,将其置于含1000 U/ml庆大霉素 +2.5μg/ml两性霉素B的生理盐水中……