王鑫滢，张秀英

（东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030）

现代药理研究表明，黄芩（Scuxiutellaria baicalensis Georgi）的粗提物及其活性部位、单体具有多种药理活性［1-2］，但对新城疫病毒（NDV）的作用目前未见报道。NDV可引发鸡和火鸡的急性、热性、败血性疫病，具有高度的接触传染性，严重危害世界养鸡业的发展［3-4］，目前兽医临床缺乏有效的防治药物。因此，研究开发出耐药性低、副作用和不良反应少的有效药物对新城疫的预防及治疗都具有重大的现实意义。本文通过对黄芩多糖的体外抗NDV的作用进行试验，为抗NDV的新型药物的研发打下基础。

1 材料与方法

1.1 鸡胚 新城疫病毒F48E9强毒株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供；HA为1∶26。

1.2 药品与试剂 黄芩（黑龙江中医药大学），胰酶，优级胎牛血清，DMEM，四甲基氮唑盐（MTT），二甲基亚砜（DMSO），均来自Sigma公司。

1.3 主要仪器和设备 CO2培养箱（Thermo，德国），倒置显微镜（Nikon，日本），恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司），索氏提取器。

1.4 鸡成纤维细胞制备［3］取10日龄鸡胚，经取材、清洗、剪碎、再清洗、消化、吹打、过滤，在37℃CO2培养箱中培养24h，制成鸡成纤维细胞。

1.5 黄芩多糖的提取、分离、纯化［4］利用水提醇沉法提取黄芩多糖，Sevage法（氯仿∶正丁醇=5∶1），除去蛋白，透析除去无机物和大分子物质，真空干燥，即得黄芩多糖。

1.6 黄芩多糖对细胞安全浓度（TC0）的测定 在CEF中分别加入不同浓度的黄芩多糖，37℃CO2培养箱中继续培养，观察细胞病变情况，根据细胞病变程度（CPE）再结合 MTT法确定多糖对细胞的TC0。CPE的记录方法：“-”为没有细胞出现CPE；“+”为1%～25%的细胞出现CPE；“++”为26%～50%的细胞出现CPE；……