丁 利，陈光达，许信刚，童德文

（西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100）

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）属于冠状病毒科、冠状病毒属成员，由其引发的猪传染性胃肠炎是猪的一种急性、高度接触性传染病，临床以呕吐、严重腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪高度致死率为特征。5周龄以上的猪死亡率较低，成年猪几乎没有死亡，但感染猪生长缓慢，饲料报酬率降低。世界动物卫生组织（OIE）将TGE定为B类传染病，是我国法定重点防控的疫病之一。本病在许多国家和地区广泛流行，经流行病学调查发现，近年来该病在我国的流行呈明显上升趋势，同时亦有病毒的分离报道［1-5］。本试验从陕西省某猪场发病猪只的腹泻粪便等样品中分离到1株猪传染性胃肠炎病毒，命名为TGEV shaanxi株，并对其进行了系统鉴定。

1 材料与方法

1.1 病料和细胞 空肠内容物及腹泻粪便采集于陕西省某疑似感染TGE的猪场，于灭菌生理盐水中冻存，低温运至实验室备用；PK-15细胞由本实验室保存。

1.2 主要试剂 DMEM为Gibco公司产品；胰酶、琼脂糖、RNase A为Sigma公司产品；新生牛血清为 Hyclone公司产品；Taq DNA聚合酶、DL-～DNA Marker、pMD18-T vector，购自大连TaKaRa公司；M-MLV逆转录酶，购自Promega公司；病毒基因组RNA提取试剂盒，购自BioTeke公司；高纯度质粒小量提取试剂盒、DNA凝胶回收纯化试剂盒，购自威格拉斯生物技术有限公司；猪传染性胃肠炎病毒弱毒疫苗，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；受体菌DH5α、猪传染性胃肠炎病毒阳性血清由中国动物卫生与流行病中心惠赠。

1.3 方法

1.3.1 病料的处理 解冻TGE病猪的空肠内容物以及腹泻粪样，反复冻融3次后，6000r／min离心5min，收集上清液，上清液经0.22μm孔径细菌滤器除菌后，置-20℃冻存备用。……