环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验

2011-08-07黄书林李佳禾张跃伟陈会玲吴文学

中国兽医杂志 2011年10期

黄书林，付萍，李佳禾，张跃伟，蒋菲，张侃，陈会玲，吴文学

（1.中国农业大学动物医学院，北京海淀 100193；2.中国牧工商（集团）总公司中牧研究院，北京丰台 100070）

猪细小病毒病是由猪细小病毒（PPV）感染引起母猪繁殖障碍的重要病原体之一，主要引起母猪发生流产、死胎、畸形胎、木乃伊胎及不孕等。近年来，猪细小病毒病有上升的趋势，并且该病常常与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒，伪狂犬病病毒等发生混合感染，给养猪业造成巨大的损失［1-2］。

环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）作为一种新兴的核酸扩增技术［3］，具有高特异性、高敏感性、快速、简便等优点［4-6］。本试验针对猪细小病毒NS-1基因设计引物，建立了猪细小病毒LAMP检测方法。

1 材料与方法

1.1 毒株及病料来源猪细小病毒7909株、NADL-2株，购自中国兽医药品监察所；猪繁殖与呼吸综合征病毒标准株（VR-2332）、猪伪狂犬病病毒Bartha-K61株、猪瘟病毒（C株）、弓形虫（RH株）的核酸样品，由本实验室制备保存。疑似PPV感染流产胎儿组织病料采自北京周边地区、山东潍坊等地规模化猪场。

1.2 方法

1.2.1 核酸DNA的提取采用基因组DNA提取试剂盒（TransGen）提取PPV 7909株、NADL-2株的细胞培养物和组织样本DNA，于-80℃保存备用。

1.2.2 LAMP引物的设计在GenBank下载了NS-1基因全长序列，利用生物学软件DNAStar的MegAlign软件进行同源性比对分析，选取NS-1基因同源性高即保守区域，使用在线LAMP引物设计软件设计并筛选出PPV特异的6条引物（表1及图1）。