单晓枫，郭伟生，吴同垒，王伟利，钱爱东

（1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118；2.吉林进出口检验检疫局，吉林 长春 130062）

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii，AV）属于弧菌科、气单胞菌属，其广泛分布于水体和陆地，可导致人食物中毒，引发胃肠炎、腹膜炎、败血症、脑膜炎等疾病［1-2］；此外，该菌还可引起各种水产动物的不同疾病的暴发，如框镜鲤败血症、青虾软壳综合征、鱼的流行性溃疡综合征等等［3-5］。维氏气单胞菌可产生一系列的毒力因子，如气溶素、溶血素、胞外蛋白酶、内毒素、粘附素等。其中溶血素（hemolysin，hly）是基因组DNA编码的毒力因子，其聚合后插到细胞膜上，形成通道，导致溶血。但有关维氏气单胞菌溶血素的研究并不充分，有许多研究甚至将气溶素与溶血素混为一谈，目前，GenBank上尚未见维氏气单胞菌溶血素的全基因序列。鉴于此，本试验依据不同气单胞菌属菌种的溶血素基因，设计1对特异性引物，克隆了维氏气单胞菌的溶血素基因片段，并对其编码蛋白进行相关分析，以期为研究维氏气单胞菌溶血素在致病、毒力诱导免疫保护，以及建立特异性免疫学检测方法等方面建立基础。

1 材料与方法

1.1 菌种 维氏气单胞菌CY0806，分离于吉林省某渔场框镜鲤，经生理生化、16SrRNA序列分析，鉴定为维氏气单胞菌，由吉林农业大学预防兽医学研究室保存；基因工程菌E.coli DH5α，由本实验室保存制备；pMD18-T载体，购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.2 主要试剂 DL-～Marker、Taq DNA聚合酶、dNTP，均购自宝生物工程（大连）有限公司；DNA凝胶回收试剂盒，购自爱思进生物技术有限公司；……