臧莹安，卢 頔，胡 波，宋 帅，李 淼，李春玲

（1.仲恺农业工程学院动物科学系，广东 广州 510225；2.广东省农业科学院兽医研究所，广东 广州 510640）

猪链球菌病（Swine streptococcsis）是由多种链球菌感染引起的危害养猪业的一种国家规定的二类动物疫病。链球菌虽然抵抗力不强，但由于抗生素的滥用，易产生耐药性，导致治疗失败［1-2］。所以，本试验通过对广东部分地区发病猪群猪链球菌可疑菌进行分离鉴定，进而对其进行药敏试验，为各猪场合理用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器 HZQ-X100振荡培养箱，购自哈尔滨市东明医疗仪器厂；电热恒温培养箱，购自上海跃进医疗器械一厂；基因扩增仪，购自杭州博日科技有限公司；稳压稳流电泳仪，购自北京市六一仪器厂；紫外透射分析仪，购自珠海星马医学仪器有限公司。

1.2 试剂 新生牛血清，托-休二氏液体培养基（THB），托-休二氏体培养基（THA），细菌微量生化反应管，药敏纸片和质控菌株，均购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.3 实验动物 18～20g雄性昆明系小鼠，购自广东省医学实验动物中心。

1.4 细菌分离培养 将疑似猪链球菌菌株S1～S20接种在THB培养基中，置于37℃振荡培养箱中培养16～18h后，在超净工作台中采用划线分离培养法用接种环挑取菌液接种于血平板上，37℃培养14～16h，经培养无杂菌者，选取α溶血、光滑圆形、半透明、直径1～2mm的小菌落，每个样品挑去3～6个疑似菌落，分别接种3mL THB培养基中，37℃培养16～18h后，仔细观察分离菌经培养后的生长情况，并挑取单个可疑菌落和液体培养物分别作革兰染色镜检。……