周桃莉,付雍,王艳艳,丁艳,谭章平,徐文岳

(第三军医大学基础部病原生物学教研室,重庆 400038)

疟疾是一种严重危害人类健康的热带传染病。构建的约氏疟原虫/斯氏按蚊实验模型不但为探讨疟原虫与蚊相互关系,而且也为研究红外期疟原虫发育机制,最终预防和阻断疟疾的传播提供了重要的实验平台。付雍等[1]构建的表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫BY265-GFP为疟疾防治机制研究提供了一种更加直观的模型,然而与野生株约氏疟原虫相比,重组约氏疟原虫BY265-GFP感染斯氏按蚊的能力明显下降,一定程度上限制了这一模型的应用。鉴于按蚊肠道细菌能活化按蚊天然免疫抑制疟原虫发育,因此,本研究观察抗生素的联合应用对斯氏按蚊感染重组约氏疟原虫BY265-GFP株的影响。

1 材料与方法

1.1 供试疟原虫、蚊媒和动物

约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)BY265-GFP株为本室构建的基因重组疟原虫[1],每周用昆明株小鼠血传1次,每5 w蚊传1次;斯氏按蚊(Anopheles stephensi):Hor株,为本实验室长期饲养繁殖的稳定蚊种。成蚊在24～26℃、相对湿度为70%～80%的养蚊室中饲养;雌性昆明株小鼠,清洁级,重约20 g,由第三军医大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂

庆大霉素、青霉素、链霉素、新霉素、泛影葡胺(上海海普药业)、新生牛血清和 RPMI1640培养基。

1.3 抗生素糖水的配制

首先将10%的糖水高压灭菌,按下列配方加入抗生素:每毫升糖水含庆大霉素15 μ g 、青霉素 10 U 、链霉素 10 μ g 、新霉素 20 μ g 。

1.4 实验分组

将3～4日龄斯氏按蚊随机分成4笼,每笼约300只雌性按蚊,设实验1组(感染前后1 d都饲糖水组),实验2组(感染前1 d饲糖水组),实验3组(感染后1 d饲糖水组)和对照组(饲普通糖水组)。……