王嘉民 朱雯怡

（上海市浦东新区浦南医院普外科，上海 200125）

结肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，高侵袭性结肠癌因其恶性程度高、进展速度快、转移范围广，成为结肠癌致死的主要原因之一。去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD）是我国传统中药斑蝥有效成分斑蝥素的衍生物。有研究提示，NCTD具有抑制肿瘤的增殖、转移和抗肿瘤血管生成作用，但多集中于体外及动物皮下实验，少有针对原位肿瘤的实验。我们以经免疫缺陷小鼠体内种植培养出的肿瘤组织作为移植源材，结合外科原位移植法构建出裸小鼠人高侵袭性结肠癌模型，并通过NCTD的应用，研究其是否有抑制体内肿瘤的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

①肿瘤细胞。人结肠腺癌细胞株HT-29，由中科院上海细胞生物研究所提供，维持在含10%小牛血清的McCoy’s 5A培养液中，用含0.25% Tyrosine和0.02% EDTA磷酸缓冲液获取。②实验动物。BALB/c nu/nu裸小鼠36 只，由上海肿瘤研究所实验动物部提供（沪动132），雄性，鼠龄6～8 周，体质量20g左右，在SPF（ specific pathogen free condition ）级条件下饲养。③注射用去甲斑蝥素（山东罗欣药业股份有限公司，国药准字H20052342）。

1.2 方 法

①裸鼠皮下移植瘤的建立和传代。将含2×107mL癌细胞的细胞悬液0.2mL注射于裸鼠皮下。当肿瘤生长至直径15mm时，取材切成1.5mm小块，再接种于下一代裸小鼠皮下，每代接种2只，接种到第4代。②人结肠癌组织块裸小鼠原位种植瘤的建立。取第4代荷瘤裸鼠皮下移植瘤同时给20只裸鼠行原位种植。方法：处死皮下荷瘤裸鼠，皮肤消毒，取出皮下肿瘤，立即浸入含青霉素、链霉素各100U/mL的生理盐水中；剔除周围结缔组织，取肿瘤生长旺盛的组织，剪碎成1.5mm直径碎块，备用。……