崔茹龙

（吉林省敦化市医院肿瘤泌尿外科，吉林 敦化 133700）

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，恶性度高，且近年来发病有上升的趋势[1]，原发性肝癌的治疗方法较多，现在主张早期彻底、积极的综合治疗，其中，化疗在原发性肝癌的治疗属于较为有效的手段之一，但由于患者对药物的敏感性不尽相同临床上化疗药物的选择是进行化疗的难题之一，本研究旨在通过测定5例肝癌患者对7种化疗药的敏感率，以探究 原发性肝癌的体外化疗药物敏感性。

1 资料与方法

1.1 入选标准与排除标准

入选标准：符合原发性肝癌的诊断标准（影像学检查有＞2cm的原发病灶且影像检查手段超过两种，AFP超过400μg/L，经组织病理证实为原发性肝癌），无其他严重心、肺、脑、肾等严重疾病以及贫血等血液方面疾病，之前从未进行过化疗，对化疗药物不过敏，在我院进行全程治疗并随访完整。排除标准：缺乏组织病理检查，对化疗药物过敏，哺乳妊娠期妇女除外。

1.2 一般资料

选取我院2005年1月至2010年12月间确诊的原发性肝癌患者50例，男41例，女9例，年龄17～75岁，平均年龄53岁，所有患者均符合入选标准，患者行手术治疗后，第一时间采集新鲜肝癌样本50例，并在无菌条件下及时送至实验室。

1.3 化疗药物及其浓度

本实验所选的化疗药物均为注射液，且均为临床上常用的治疗原发性肝癌的化疗药物，药物体外浓度根据体内最大血药浓度：阿霉素（ ADM，意大利进口，0.4μg/mL） 、5-氟脲嘧啶（5-Fu，上海启东制药厂产品，10μg/mL） 、顺铂（DDP，锦州九泰药业有限公司产品，4μg/mL） 、丝裂霉素（ MMC，日本进口，3μg/mL） 、长春新碱（VCR，中国民生药厂，0.5μg/mL）、羟基喜树碱（黄石李时珍药业生产，4μg/mL）、甲氨蝶呤（ MTX，上海12制药厂产品，2μg/mL） 。

1.4 仪器与试剂

酶标仪、倒置显微镜、图像分析仪、100级工作台、二氧化碳培养箱、小牛血清、二甲亚砜、四甲基氮唑蓝、RPMT-1640培养液、96孔培养板、Ficoll分离液。

1.5 方法

标本处理方法：所有标本均为肝癌患者手术中在无菌环境下切取，将各标本周缘的坏死组织、脂肪以及纤维组织等切掉，剩下生长较好的肿瘤组织块，将肿瘤组织块放进D-Hank液中充分洗涤，洗净之后将组织块剪成1mm大小的碎块，将0.25%的胰蛋白酶注入组织碎块中，并在37°C下放置30min，使组织块充分消化，然后采用钢筛进行过滤，制备单细胞悬液，将制备好的细胞悬液放于含Ficoll分离液的分离管中进行离心，取悬液上层的乳白色层，将其放于RPMT-1640培养液，采用台盼蓝染色，并进行活细胞计数，在96孔培养板接种，各孔均加入100μL细胞悬浮液。MTT检测法：在二氧化碳培养箱中放入96孔培养板，培养箱温度37°C，5%CO2饱和湿度，培养时间24h，将所有孔分为两组，实验孔与对照孔，化疗药物加入实验孔中，等量PBS液加入对照孔中，延长培养时间至48h，在各孔中加入MTT25μL，在培养6h，在每孔中加DMSO100μL，通过震荡使蓝色结晶尽快溶解，结晶彻底溶解后将培养板放于酶标仪上并测量各个孔的光密度值，检测波长为570nm。参考波长630nm。计算抑制率，公式为：抑制率=（1-实验孔平均OD值/对照孔平均OD值）×100%。高度敏感为IR＞50，敏感为30＜IR＜50，不敏感为IR＜30。

2 结 果

经过数据采集，在所检测的化疗药物中，羟基喜树碱敏感率最高，为100%，长春新碱敏感率最低，为18%，肝癌患者对化疗药物的敏感率由高到低的顺序为羟基喜树碱＞5-氟脲嘧啶＞丝裂霉素＞顺铂＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞长春新碱（表1），各组敏感性具有明显的差异（P＜0.05）。

表1 体外药敏试验结果

3 讨 论

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，恶性度高，且近年来发病有上升的趋势，原发性肝癌的治疗方法较多，现在主张早期彻底、积极的综合治疗[2]，将多种治疗手段序贯结合应用，例如，原发性肝癌动脉化疗栓塞治疗后合并采用手术切除治疗、手术治疗后合并采用放、化疗等其他治疗手段。在原发性肝癌的治疗上，采用全身化疗取得的临床效果不明显，且在患者合并腹水、黄疸以及全身衰竭等情况下不能采用全身化疗，同时，肝癌患者对化疗药物的敏感性反应也参差不齐，即使同种病理类型的肝癌敏感性反应也不尽相同，因此，在原发性肝癌的化疗中，检测患者对药物的敏感性是非常必要的。

在本研究的所用7中化疗药物中，羟基喜树碱敏感率最高，为100%，长春新碱敏感率最低，为18%，肝癌患者对化疗药物的敏感率由高到低的顺序为羟基喜树碱＞5-氟脲嘧啶＞丝裂霉素＞顺铂＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞长春新碱，各组敏感性具有明显的差异（P＜0.05），5-氟脲嘧啶在临床治疗肝癌中较为常用，但本研究的结果中，敏感率最高的化疗药物为羟基喜树碱，在临床应用中，可以考虑将两种药物联合应用，以减少毒副作用以及耐药性的发生，5-氟脲嘧啶属抗代谢药[3]，能够阻断DNA的合成以及干扰RNA的合成，羟基喜树碱能够与DNA拓扑异构酶发成反应，从而抑制DNA合成，二者合用可以起到更好的疗效，长春新碱能够影响微管蛋白聚合影响癌细胞有丝分裂，并可以干扰蛋白质代谢，对肿瘤具有一定的杀伤作用，但在本研究中，长春新碱的敏感率为18%，在所用7中化疗药物中最低，具体机制有待进一步探究。本研究中所采用的药敏试验为MTT比色法，MTT比色法属于药敏试验中的一种，具有简便、经济、重复性好的特点，并且能够筛选多种药物[4]，可以为临床上肿瘤个体化治疗提供较为可靠的依据。

综上所述，原发性肝癌对化疗药物的敏感性不同，即使同种病理类型的肝癌同同种化疗药物的敏感性亦有差别，临床治疗应该根据药敏试验的结果进行个体化综合治疗。

[1]傅建民,张伟,彭向红,等.多耐药相关蛋白在肝细胞中的表达及其临床意义[J].中华普通外科杂志,1999,26(1) ：22.

[2]余少鸿,严律南.多药耐药相关蛋白2与肝胆疾病的关系[J].重庆医学,2005,34(7)： 1092.

[3]姜圣亮,王天翔,项明,等.肿瘤细胞和TIL 对化疗药物敏感性的测定[J].癌症,2000,19 (12) ： 1119-1123.

[4]李小民,蒋芹,谢晓东,等.MTT 法测定癌细胞对抗癌药物敏感性的实验研究[J].四川肿瘤防治,2000,13 (3) ： 145-147.