李志杰，张 悦，刘煜敏，陆海英，李亚丽，张 燕

(上海中医药大学1科技实验中心，2基础医学院，3护理学院，上海 201203)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)又称糖尿病肾小球硬化症，其特点主要以肾小球血管受损、硬化为主，临床上表现为尿蛋白排泄量增加[1]。大量研究表明，肾小球脏层上皮细胞即足细胞损伤是形成DN蛋白尿的关键因素[2，3]。而维持足细胞结构和功能的主要裂孔隔膜蛋白分子(nephrin和podocin)表达改变是足细胞损伤的重要标志。黄芪多糖(Astragalus polysaccharin，APS)是从补气中药黄芪中提取的有效成分。临床与实验证明黄芪多糖可以通过多条途径对DN发挥治疗作用[4，5]，但是通过稳定足细胞标志蛋白nephrin和podocin的表达而发挥保护作用未见报道。本研究旨在通过观察nephrin和podocin在DN大鼠肾小球足细胞中表达的变化，探讨黄芪多糖对DN肾脏的保护作用及机制。

材料和方法

1 材料

1.1 动物 健康SPF级雄性SD大鼠24只，体重(220±20)g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物许可证号为SCXK(沪)2007－0005。

1.2 药物与试剂 黄芪多糖购于森馨生物，纯度70%。链脲佐菌素(streptozocin，STZ)购于 Sigma，批号为119K1591。山羊抗兔nephrin抗体、山羊抗兔podocin抗体购于Abcam。小鼠来源GAPDH(甘油醛－3－磷酸脱氢酶)购于上海康成公司。HRP标记的山羊抗小鼠Ⅱ抗、HRP标记的山羊抗兔Ⅱ抗购于晶美生物工程有限公司。PVDF膜购于Millipore。其它试剂均为国产分析纯。

1.3 主要仪器 强生稳步型血糖测试仪(强生中国有限公司)，酶标仪(BioTek PowerWave XS2)，电泳装置(Bio－Rad)，倒置荧光显微镜(Olympus CKX41)，全自动荧光成像系统(HR 16)。

2 方法

2.1 糖尿病肾病模型的制备和分组 动物适应性喂养1周后，禁食12 h，按60 mg·kg－1对造模大鼠(16只)行一次性腹腔注射STZ(0.1 mol·L－1柠檬酸盐缓冲液，pH 4.5，新鲜配制)。……