闫凤霞，钱 涛，高维娟，叶冬青，任立群，张雅丽，侯志平

(1承德医学院病理生理学教研室，河北 承德 067000;2河北省人民医院，河北 石家庄 050051;3河北化工医药职业技术学院，河北 石家庄 050026)

黄芪是中医药治疗缺血性脑血管病的常用药物，具有清除自由基、减轻脑水肿、对抗炎症介质、缓解钙离子超载、改善神经元能量代谢、降低兴奋性氨基酸毒性等作用[1]。本课题组前期实验证实，黄芪注射液可减轻全脑缺血再灌注损伤引起的大鼠海马神经元凋亡，并可抑制离体培养大鼠海马神经元因缺氧缺糖/复氧复糖所致的凋亡[2]，但黄芪注射液抑制神经元凋亡的机制尚不清楚。目前已知，钙超载是引起细胞凋亡的重要因素之一，本研究通过对原代培养的大鼠海马神经元施加缺氧缺糖/复氧复糖因素，模拟脑缺血再灌注损伤过程，观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白(calmodulin，CaM)表达的影响，探讨黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的分子机制。

材料和方法

1 材料

1.1 动物 SD大鼠，新生24 h之内，雌雄兼有，清洁级动物，由河北省实验动物中心提供，合格证号冀医动字第702003号。

1.2 试剂和仪器 兔抗caspase－3多克隆抗体(非激活)购于北京中杉金桥公司。Caspase－3蛋白免疫组化SP试剂盒和Western blotting试剂盒购于北京中杉金桥公司。BCA蛋白定量试剂盒购于上海申能博彩生物公司。CaM RT－PCR引物由上海生物工程有限公司设计，RT－PCR试剂盒购自大连宝生物公司。DNaseⅠ、多聚赖氨酸和阿糖胞苷购自Sigma。胎牛血清和马血清由HyClone生产。……