孙 湛，吴秉婷，李道坤，鲍 朗

(四川大学华西医学中心感染免疫研究室，四川 成都 610041)

钩端螺旋体(Leptospira，简称钩体)在世界范围内广泛分布，可引起人兽共患自然疫源性疾病-钩端螺旋体病(leptospirosis，简称钩体病)[1]。钩体病患者临床症状明显，严重者可出现肾功能障碍，黄疸，皮肤、脏器广泛性出血，尤其是急性肺弥漫性大出血而致口鼻涌血死亡[2]。钩体病导致急性肺弥散性大出血的机制仍未被阐明，因此对钩体的致病机制研究仍具有十分重要的现实意义。赖型钩端螺旋体全基因组测序结果预测了9个和钩端螺旋体毒力相关的溶血素基因[3]。大多数溶血素在问号状赖型钩体中表达并且被分泌入环境中。其中HlyX(LA0378)是非鞘磷脂酶类溶血素，研究已发现该溶血素能在体外引起绵羊红细胞溶血[4]，且促进ECV304细胞乳酸脱氢酶以及一氧化氮的释放[5]，但其确切的对血管内皮细胞通透性以及对细胞凋亡率的影响尚无报道。本研究从赖型钩端螺旋体56601株中克隆、表达hlyX基因，并将目的蛋白作用于HUVECs细胞株，检测其对单层血管内皮细胞通透性的影响及其对细胞凋亡率的影响，探讨该蛋白在钩端螺旋体引起肺弥散性出血致病过程中可能起到的作用及可能机制。

材料和方法

1 材料

1.1 菌株、质粒和细胞 钩端螺旋体赖型56601株由本研究室保存并定时感染豚鼠传代以保持毒力。原核表达质粒pET32a(+)本室常规保种，感受态细胞E.coli BL21(DE3)pLysS购自 Tiangen。HUVECs细胞株，由四川大学华西医院移植免疫实验室提供。

1.2 主要试……