(河北省人民医院，石家庄 050051)

脂肪分解代谢是脂肪细胞内中性脂质水解释放甘油和游离脂肪酸(FFA)的过程，此过程受激素敏感性脂肪酶(HSL)和脂肪组织甘油三酯脂酶(ATGL)调控［1］。研究显示，内脏脂肪与脂肪代谢紊乱、糖尿病及心血管疾病有关［2～4］，胰岛素抵抗(IR)与脂肪分解代谢异常有关［3，4］。为探讨胆囊三角脂肪堆积与其脂肪组织中脂肪酶活性、IR的关系，我们对55例肝胆疾病患者进行了脂肪组织中的ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达检测。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年9月～2008年3月在我院肝胆微创外科择期行腹腔镜胆囊切除术患者55例，男35 例、女20 例，年龄(40.78 ±11.56)岁;其中胆囊结石39例，非胆囊结石16例。排除急性炎症、肿瘤、肝肾功能不全、自身免疫性疾病及其他影响机体代谢的内分泌疾病(如甲状腺功能亢进、Cushing综合征、多囊卵巢综合征等)。根据术中所见胆囊三角区脂肪堆积程度，分为正常组(薄层脂肪均匀堆积)27例、脂肪堆积组(脂肪堆积)28例，两组性别、年龄有可比性。两组均于术中取约2.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的胆囊三角脂肪一块，置入液氮中－70℃保存，用于RNA和蛋白提取。

1.2 方法

1.2.1 临床参数测定 测量两组血压、腰围及臀围，根据腰围、臀围计算腰臀比(WHR)。

1.2.2 实验室检测 抽取患者入院次晨空腹肘静脉血5 ml，离心后分离血清。采用美国产全自动生化仪检测空腹血糖，放射免疫法检测空腹胰岛素(FINS)，铜显色法检测游离脂肪酸(FFA);计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。

1.2.3 ATGL mRNA、HSL mRNA 及其蛋白表达检测 ① ATGL、HSL蛋白表达:采用Western Blotting法检测ATGL、HSL蛋白表达，结果用样品的光密度值与β-actin的光密度比值表示。②ATGL mRNA、HSL mRNA表达:采用RT-PCR法检测ATGL mRNA、HSL mRNA表达。用RNAiso plus进行组织总RNA提取，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定所提RNA的完整性，紫外分光光度计比色测定OD260/OD280鉴定RNA的纯度，并进行定量。引物设计用DNAMAN软件设计，由上海生物工程公司合成。人ATGL引物序列上游引物:5'-GTGTCAGACGGCGAGAA TGT-3'，下游引物:5'-GTTGAACTGGATGCTGGTGTTG-3';人HSL引物序列上游引物:5'-ACCTCTTTGACCTGGACCCA-3'，下游引物:5'-CCTGTCTCGTTGCGTTTGTAG-3';人β-actin引物序列上游引物:5'-TGGCACCACACCTTCTACAA-3'，下游引物:5'-AATGTCACGCACGATTTCCC-3'。用UVP凝胶图像成像分析系统读取目的基因与内参基因条带密度，并以两者比值作为目的基因表达的相对量。

1.2.4 统计学方法 采用 SPSS17.0统计软件，计量资料用±s表示，先行正态性检验及方差齐性检验，两样本均数比较用t检验或χ2检验;各指标间用直线相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床参数比较 脂肪堆积组WHR为0.90 ±0.24，正常组为 0.70 ±0.15，两组比较有统计学差异(P＜0.05);两组血压比较无统计学差异(P ＞0.05)。

2.2 两组实验室指标比较 正常组 FINS、FFA、HOMA-IR 分别为(11.15 ±4.67)mIU/L、(0.66 ±0.23)mmol/L、1.44 ± 0.49，脂肪堆积组分别为(25.87 ±14.21)mIU/L、(1.35 ±0.45)mmol/L、2.5±0.5。两者比较均有统计学差异(P均＜0.05)。

2.3 两组ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达比较 见表1。

2.4 相关分析 ATGL、HSL蛋白表达均与 FINS、FFA呈明显负相关(r分别为 －0.235、－0.214、－0.185、－0.246，P 均 ＜0.05)。直线相关分析显示，ATGL与HSL蛋白表达呈高度正相关(r=0.708，P ＜0.01)。

表1 两组ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达比较( ±s)

表1 两组ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达比较( ±s)

注:与正常组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

组别 n mRNA ATGL HSL蛋白ATGL HSL正常组27 2.32 ±0.25 2.43 ±0.41 0.98 ±0.15 1.56 ±0.30脂肪堆积组 28 1.12 ±0.21＊＊1.45 ±0.25* 0.60 ±0.12* 1.03 ±0.19*

3 讨论

HSL和ATGL是脂肪分解代谢的关键酶，占脂肪组织中甘油三酯水解活性酶的95%。本研究显示，与正常组比较，脂肪堆积组的内脏脂肪组织(胆囊三角)ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表达均降低，且其ATGL和HSL蛋白表达呈高度正相关，与文献报道一致［1］;说明胆囊三角脂肪组织中的ATGL、HSL活性决定脂肪堆积程度。本研究还发现，脂肪堆积组的血清FFA高于正常组，且与脂肪组织中的ATGL和HSL蛋白表达呈负相关;说明脂肪组织中的ATGL mRNA、HSL mRNA转录和蛋白表达不仅影响内脏脂肪代谢，还与FFA水平有关。本研究结果与有关报道一致［5］。

IR 是多种内科疾病发病的基础，据报道［2，3］，脂肪代谢紊乱与IR形成机制有关。本研究脂肪堆积组HOMA-IR、FFA明显高于正常组，与多数报道一致［2，3，5］。说明内脏脂肪组织在 IR 形成机制中可能起一定作用。另外，本研究脂肪堆积组WHR明显高于正常组，且WHR与其HSL蛋白表达呈负相关;WHR可否作为临床评估内脏脂肪组织中HSL活性和胆囊三角脂肪堆积程度的指标，尚待进一步研究。

［1］徐冲，徐国恒.脂肪组织甘油三酯水解酶参与脂肪分解调控［J］.生理科学进展，2008，39(1):10-14.

［2］Wu CK，Yang CY，Lin JW，et al.The relationship among central obesity，systemic inflammation，and left ventricular diastolic dysfunction as determined by structural equation modeling［J］.Obesity Silver Spring，2011，20(3):36-42.

［3］Veilleux A，Caron-Jobin M.Vsisceral adipocyte hypertrophy is associated with dyslipidemia independent of body composition and fat distribution in women［J］.Diabetes，2011，60(4):1055-1062.

［4］陈述林，王淑艳，唐与晓.糖尿病和肥胖症患者网膜脂肪组织中的内脂素表达及其影响因素［J］.山东医药，2010，50(39):25-27.

［5］Ryden M，Jocken J，van Harmelen V，et al.Comparative studies of the role of hormone-sensitive lipase and adipose triglyceride lipase in human fat cell lipolysis［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2007，292(6):1847-1855.