张海波 梁伟之 高 莺 胡 静

二甲双胍是一种对抗2型糖尿病的常用药物，通过降低肝脏产生葡萄糖，增加外周组织对胰岛素的敏感性，从而实现葡萄糖的利用，其临床药效已受到充分肯定［1］。2型糖尿病人往往伴发骨密度减低，已经有学者开始研究二甲双胍对骨代谢的影响，但目前相关报道还较少［2～4］。因此，本实验旨在原代培养大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)的基础上对其进行骨向诱导分化，观察二甲双胍对细胞增殖和分化的影响，并从转录因子水平探讨其机制，为深入研究双胍类药物的成骨作用提供实验依据。

材料与方法

1.材料:α－MEM培养基、胰酶、胎牛血清购自Gibco公司;二甲双胍购自Calbiochem公司;地塞米松、β－甘油磷酸钠、维生素C、维生素D3及茜素红均购自Sigma公司。

2.方法:(1)大鼠BMSCs的原代分离培养及骨向诱导分化:选用鼠龄匹配、体重200～250g的SD雌性大鼠(四川大学华西医学中心实验动物部提供)，无菌条件下将其胫骨和股骨的骨髓用注射器冲出，在含有10%胎牛血清及100μl/ml双抗的α－MEM基础培养基中贴壁培养。细胞生长融合达到80%时，用胰酶消化，进行1∶2传代，传代细胞的培养基为骨向诱发分化培养基，即α－MEM基础培养基中添加10－8mol/L地塞米松、10mmol/L β－甘油磷酸钠、50mg/L维生素C和10mmol/L维生素D3。依照是否添加100μmol/L二甲双胍将细胞分为用药组和非用药组，每2～3天换液［4］。(2)四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞增殖:细胞骨向分化培养24h后，将培养基倒掉，加入MTT溶液，在37℃、5%CO2培养箱中继续孵育4h后，吸弃上清，添加二甲亚砜溶解结晶物，然后在570nm波长下检测不同组别细胞的光吸收值(optical density，OD)。……