柳志杰，章 辉，周 利，花 强

(华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237)

微生物油脂又称单细胞油脂，是微生物在一定条件下产生并储存于菌体内的甘油脂，其脂肪酸组成以C16、C18系脂肪酸(如硬脂酸、油酸和亚油酸)为主。将微生物油脂进行酯化反应，可以获得生物燃料[1，2]。脂肪酸含量及组成可以作为微生物分类鉴定的指标[3～5]，相对于抗原检测和杂交，具有不需要探针的优势；在代谢组学研究中，微生物细胞脂肪酸组成及含量的动态变化可以反映细胞的代谢状态[6]。因此，微生物脂肪酸组成及含量分析具有重要的意义。

文献报道细胞内油脂总含量的分析方法有苏丹黑B染色法[7]、磷酸香草醛法[8]以及尼罗红染色法[9]，但这些方法均无法分析细胞油脂脂肪酸的组成。而气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)[10]可以直接通过图库检索得到样品的信息，不需要再通过标样比对进行样品的确认，分析方便，具有普遍的应用意义。因此，作者在此采用GC-MS法，对油脂酵母皮状丝孢酵母的油脂分布以及脂肪酸组成进行分析，拟为微生物细胞脂肪酸的分析应用提供新途径。

1 实验

1.1 菌株与试剂

油脂酵母皮状丝孢酵母(Trichosporoncutaneum)，自行保藏。

三氟化硼溶液、癸酸(C10：0)，Sigma公司；其它试剂均为分析纯。

1.2 培养基

合成培养基(g·L-1)：葡萄糖12.0，(NH4)2SO40.4，KH2PO43.0，MgSO4·7H2O 0.5，L-组氨酸0.03，L-亮氨酸0.125，L-蛋氨酸0.025，尿嘧啶0.04，微量元素溶液1 mL，维生素溶液1 mL。

微量元素溶液(g·L-1)：EDTA 15.0，ZnSO4·7H2O 4.5，CoCl2·6H2O 0.3，MnCl2·4H2O 1.0，CuSO4·5H2O 0.3，CaCl2·2H2O 4.5，FeSO4·7H2O 3.0，NaMoO4·2H2O 0.4，H3BO31.0，KI 0.1。

维生素溶液(g·L-1)：D-生物素0.05，泛酸钙1.0，烟酸1.0，维生素B11.0，维生素B61.0，对氨基苯甲酸0.2，肌醇25。

1.3 培养条件

将对数生长中期的种子液接种到装有0.8 L培养基的1.5 L发酵罐中，于30 ℃、480 r·min-1培养，通气量1.5 vvm。……