刘 靓，娄 忻，张 莉，关亚鹏

(华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心，河北 石家庄 050015)

卡泊芬净(Caspofungin,代号MK-0991)是新型抗真菌化合物棘白霉素类中第一个用于临床的药物。2001年11月美国FDA和欧洲已批准用于两性霉素B治疗无效或不能耐受两性霉素B的侵袭性曲霉病患者[1]。卡泊芬净是葡聚糖合成酶抑制剂，非竞争性地抑制真菌细胞壁的1，3-β-D-葡聚糖的合成，从而发挥杀菌作用[2]，它是天然产物Pneumocandin B0的半合成衍生物。作者以Pneumocandin B0PB5-31为出发菌株，从选育高产菌株和提高产物中有效组分的比例两方面进行研究，以期提高Pneumocandin B0的发酵水平。

1 实验

1.1 材料

1.1.1 菌种

供试菌株为Pneumocandin B0PB5-31。

1.1.2 培养基

(1)分离及斜面培养基：PDA 。

(2)种子培养基：可溶性淀粉、蛋白胨、棉籽饼粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、玉米浆、碳酸钙。

(3)发酵培养基：甘露醇、葡萄糖、棉籽饼粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁。

1.2 方法

1.2.1 摇瓶培养

1.2.1.1 摇瓶种子培养

250 mL三角瓶内装40 mL培养基，接入成熟的斜面孢子，25 ℃、220 r·min-1下摇床培养约48 h。

1.2.1.2 摇瓶发酵培养

250 mL三角瓶内装40 mL培养基，接入成熟的种子，25 ℃、220 r·min-1下摇床培养约180 h。测定发酵液效价。

1.2.2 菌种诱变与筛选

1.2.2.1 单孢子悬浮液制备

将Pneumocandin B0PB5-31孢子斜面加蒸馏水10 mL，制成孢子悬浮液，倒入盛有玻璃珠的三角瓶中，充分振荡，然后用玻璃纤维过滤，制成单孢子悬浮液，供诱变处理使用。

1.2.2.2 氯化锂敏感度测试

选用氯化锂浓度为0.40%、0.50%、0.60%进行测试处理。氯化锂与分离培养基按上述比例混合后，倒制平板，涂布孢子液。培养3～5 d，从菌落生长情况观察其对氯化锂的敏感度；10 d左右观察菌落形态。……