姚高峰，秦秀林，储 炬，钱江潮

(华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237)

S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-Adenosyl-L-methionine，简称SAM)是一种重要的中间代谢物，广泛存在于微生物、动物、植物体内，可作为甲基、亚甲基、氨基、核糖、氨丙基的供体，参与体内的各种生化反应[1～3]。作为一种具有重要生理活性的物质，SAM在治疗肝炎、肝功能紊乱、关节炎、抑郁症、心血管等疾病以及抗衰老、防癌[4]等方面发挥着重要作用[5，6]，市场需求日益增大。

生物反应器工程国家重点实验室通过在重组毕赤酵母(Pichiapastoris)中高效表达SAM合成酶，获得了能大量积累SAM的重组菌G/DS16[7]。但利用HPLC方法定量分析胞内SAM含量及SAM合成酶活性时存在保留时间长或峰宽、分离效果不佳的问题[8～10]。

针对胞内SAM抽提液及SAM合成酶测定体系中SAM的分离，作者对HPLC方法的流动相和洗脱程序进行优化，以建立一种分离效果好、精确度高、重复性好、保留时间适中的SAM定量分析方法，用于测定胞内SAM含量与SAM合成酶活性。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

SAM标准品，Sigma公司；ATP、L-Met，上海生工生物工程有限公司；高氯酸、甲酸铵、甲酸均为分析纯；水为双蒸水。

Agilent HP1100型高效液相色谱仪，Thermo Scientific型冷冻离心机，QT-1型漩涡混合器，电子天平，恒温水浴锅，0.22 μm水相滤头等。

1.2 菌种

菌种G/DS16，自行构建保藏[7]。G/DS16为基因工程改造菌，甲醇诱导并补加甲硫氨酸后胞内SAM合成酶活性增大，SAM含量较高。

1.3 色谱条件

Thermo-BioBasic SCX色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲酸铵溶液(pH值4.0)，流速1 mL·min-1，检测波长254 nm，柱温25 ℃，进样量10 μL。

1.4 流动相的配制

准确称取31.5 g甲酸铵溶于水中，定容至1000 mL，配制成浓度为0.5 mol·L-1的甲酸铵溶液，用甲酸调pH值4.0左右。……