余 倩

(1.仲恺农业工程学院轻工食品学院,广东 广州 510225 2.中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东 广州 510275)

杆状病毒是一类节肢动物专一性的病毒，它们带有杆状的核衣壳，基因组是由大小约为80～180 kb双链环状DNA所构成[1]。杆状病毒的宿主范围窄，大部分杆状病毒只能感染几种昆虫甚至是专一性的一种。

杆状病毒生活周期主要分为以下几步：进入细胞、早期基因表达、DNA的复制、晚期基因表达、极晚期基因表达、芽生型病毒(budded virus, BV)的组装和释放、核多角体蛋白包含体(occlusion-derived virus, ODV)的形成。

斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltNPV)和甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodopteraexiguamultiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)的全基因组已完成测序[2-3]，两者的基因组相似性程度高，经研究发现两者不能交叉感染各自宿主，SeMNPV感染SpLi-221细胞会引起细胞凋亡[4]，而SpltNPV感染Se301细胞的研究还未见报导。为了了解SpltNPV感染Se301细胞的进程并寻找病毒感染失败的原因，本研究对SpltNPV感染后的Se301细胞进行了生化分析，发现病毒蛋白表达受阻是SpltNPV感染Se301细胞失败的主要原因。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 昆虫细胞与病毒 野生型SpltNPV中山大学分离株(ZSU strain)由本实验室保存。SeMNPV-SeUS1引自美国加州大学Riverside分校B.A.Federici教授实验室。甜菜夜蛾细胞Se301由荷兰Wageningen大学J.M.Vlak教授惠赠，用w=10 %胎牛血清的Grace′s培养基 (Invitrogen) 27 ℃培养。

1.1.2 供试昆虫 斜纹夜蛾、甜菜夜蛾幼虫由本实验室养虫室提供，为人工饲料饲养的健康幼虫。人工饲料配方见参考资料[5]，饲养温度 27～28 ℃。

1.2 方法

1.2.1 病毒多角体扩增 将病毒多角体涂布于人工饲料表面喂饲感染4龄初的昆虫幼虫，感染4～5 d后收集呈现典型病毒感染症状的幼虫(虫体倒挂，身体肿胀，呈灰白色)，置室温下静置2至3天让其自然发酵(病毒进一步成熟和虫体进一步液化)。……