徐 伟,朱晓娟,蔡 楠,张秀华,范志宁,刘 政,季国忠

0 引 言

大肠癌是指起源于大肠黏膜上皮的恶性肿瘤。近几年发病率迅速上升,已成为我国最常见的 5大恶性肿瘤之一,5年生存率 60%左右,但治疗效果 30年来无显著提高[1-2]。李宏武等[3]应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测到在大肠癌组织中肝细胞生长因子(hepatic growth factor,HGF)及其受体 c-Met mRNA是过量表达的,且与肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关。本研究选择了全人源抗 c-Met单链片段及PE38KDEL表达融合IT,通过选择大肠癌细胞株Colo205及 SW480,观察重组 IT抗 c-Met/PE38KDEL对大肠癌细胞增殖及凋亡的影响,为大肠癌的靶向治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 大肠癌细胞株 Colo205及 SW480均为本实验室保存。重组 IT抗 c-Met/PE38KDEL为本课题组前期实验构建、表达并鉴定,能够特异性的结合并杀死 c-Met阳性肿瘤细胞株,而对 c-Met阴性细胞无结合活性[4](抗 c-Met单链片段是全人源噬菌体 Fab抗体库筛选出的抗 c-Met的特异性 Fab片段改造得到的,经检测显示抗c-Met保留有完整抗体分子结合抗原的特异性,且其免疫原性弱,是肿瘤导向治疗的理想载体[4]),DMEM细胞培养基购自 Inventrogen公司,胎牛血清购自杭州四季青试剂公司,CCK-8购自Sigma公司,[3H]-亮氨酸购自中国同位素有限公司,caspase检测试剂盒购自 Biovision公司,不含亮氨酸的 DMEM培养基购自北京清大天一生物技术有限公司。

1.2 细胞培养 大肠癌细胞株 Colo205及 SW480均在 37oC、5%CO2条件下,用含 10%胎牛血清(加青霉素 100U/m l、链霉素 100μg/m1)的 DMEM培养液常规培养。

1.3 CCK-8法检测 IT抗 c-Met/PE38KDEL对 2株大肠癌细胞的增殖抑制作用 取对数生长期Colo205及 SW480细胞 0.25%胰酶消化制成细……