DPPH法筛选大血藤抗氧化活性有效部位*
2011-07-12冯改利宋小妹羽中陕西中医学院咸阳712046
冯改利 宋小妹 邓 羽中 豆 勇 陕西中医学院(咸阳 712046)
大血藤(Cau lis Sargentodoxae)为大血藤科植物大血藤(Sargentodoxacuneata(Oliv.)Rehd.Et W ils.)干燥茎,主产于河南、安徽、江苏、浙江、湖北、四川、甘肃等省。其藤茎具有清热解毒、活血通经及祛风除湿等功效,用以治疗肠痈腹痛、经闭痛经、风湿痹痛、跌打扑痛[1]。据文献报道,大血藤化学成分主要以酚酸类为主,酚酸类一般具有抗氧化的活性[2-3]。本实验拟采用 DPPH抗氧化体外实验的方法,筛选大血藤抗氧化的活性部位。为大血藤药理研究和临床应用提供参考。
1 实验材料 1.1 试药 UV 1102紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);电子天平(萨多利斯 GB2042电子天平(瑞典);药材产自四川省地,经陕西中医学院学生药系王继涛高级实验师鉴定为木通科大血藤植物 Sargentodoxa cuneata(Oliv.)Rehd.Et W ils.的干燥茎;抗坏血酸(天津市天力化学试剂有限公司,批号:2010608);2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基(DPPH)(批号:CR0032);水为纯净水,其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果 2.1 样品的制备 2.1.1 供试品的制备:取大血藤药材饮片200 g,分别以 10倍量和8倍量的水煎煮2次,合并提取液,于 90℃水浴浓缩至500m L。分别以三氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇200、200、200m L萃取 3次,萃取液于 90℃浓缩至干,以无水乙醇溶解,定容于50m L量瓶中。萃取剩余药液定容至500m L,取100m L,加乙醇至醇浓度到50%,静置,过滤,于 90℃浓缩至干,以50%乙醇定容于 25m L量瓶,配制成相当于生药浓度 4 g◦ m L-1,于-4℃储存备用。
精密称取抗坏血酸 250.11 mg,用无水乙醇溶解定容于 50m L量瓶中,定容得 5.0022 mg◦ m L-1贮备液,置于冰箱中冷藏备用。
2.1.2 对照品的制备:精密称取 DPPH约 3.5m g,用无水乙醇溶解,定容于 50 m L量瓶中,置于冰箱中冷藏备用(临用时配,只能稳定存在 5 h,深蓝色 )。……
