吕海涛 王文斌 刘润田 边 伟 马毓梅 张树斌

(河北医科大学第二医院肝胆外科，河北 石家庄 050000)

胆囊癌是一种少见的恶性肿瘤并且预后极差，术后5年生存率是5% ～42.3%，除手术之外缺乏有效的治疗手段〔1〕。目前对胆囊癌的恶性生物学行为仍缺乏充分的认识。文献报道，趋化因子CXCL12与其受体CXCR4所构成的CXCL12-CXCR4生物学轴(CXCL12-CXCR4 biological axis)在多种实体肿瘤的播散和器官特异性转移中发挥着重要的作用，其在胆囊癌中的表达及其作用机制未见报道。本文利用免疫组化方法，检测CXCL12与CXCR4蛋白在胆囊癌中的表达，并对其表达意义进行探讨。

1 资料与方法

1.1 材料 我院手术切除病理证实胆囊癌标本44例、10例胆囊腺瘤。44例胆囊癌患者中，男22例，女22例，年龄40～78〔平均(60.7±16.5)〕岁。术前均未作放疗、化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗。Nevin分期为Ⅰ期3例，Ⅱ期11例，Ⅲ期2例，Ⅳ期7例，Ⅴ期21例;高分化16例，中分化10例，低分化18例;有淋巴结转移17例;腺癌34例，其他10例。

1.2 试剂 兔抗人CXCL12单克隆抗体为美国RD公司产品，鼠抗人CXCR4单克隆抗体为Abcam公司产品。检测试剂采用福州迈新生物技术开发有限公司免疫组织化学ElivisionTMplus检测试剂盒，操作按照试剂盒说明书进行。

1.3 方法 切片常规脱蜡、水化后，在pH6.0枸橼酸酸盐缓冲液中加热修复15 min，温度98℃。0.3%过氧化氢溶液室温孵育10 min。滴加一抗(CXCL12稀释浓度为4μg/ml;CXCR4稀释浓度为5μg/ml工作液)，孵育过夜，滴加聚合物增强剂，室温下孵育20 min。滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30 min，滴加新鲜配制的二氨基联苯胺(DAB)溶液显色，苏木素复染，盐酸酒精分化。用已知阳性切片作对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。……