朱春晖，谢 勇，吕农华#

1)南昌大学医学院研究生部南昌330006 2)南昌大学第一附属医院消化研究所南昌330006

抗代谢药物5-氟尿嘧啶(5-FU)是一种在肿瘤治疗中经常使用的化疗药物，其本身是无活性的，在细胞内转化为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸(5-fluoro-2-deoxyuridine 5-monophosphate，5-FdUMP)等活性代谢产物［1］，在 RNA 和 DNA 代谢中发挥作用［2-4］。作者观察了5-FU对胰腺癌sw1990细胞增殖及相关基因表达的影响，探讨5-FU抗肿瘤作用的潜在机制。

1 材料与方法

1.1 材料 胰腺癌sw1990细胞株由上海第二军医大学长海医院屠振兴教授惠赠。主要试剂:5-FU(上海旭东海普药业有限公司)、Trizol、M-MLV、dNTP、OligodT(15)、RNasin(Promega公司);无核酶水;Mastermix(Tiangen);石蜡油;无水乙醇;异丙醇;氯仿;总蛋白提取试剂盒(北京普利莱公司);各种抗体(Santa Cruz公司);荧光试剂盒(Pierce公司);DMEM(Gibco公司);胎牛血清 (杭州四季青公司);琼脂糖 (Amresco公司);其余试剂为国产分析纯。

1.2 实验分组 按6×3析因设计进行实验分组。因素1 为 5-FU 剂量，包括 0、50、100、200、400 和 800 mg/L共6个水平。因素2为作用时间，包括24、48和72 h 3个水平。使用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液，于37℃、体积分数5%CO2培养箱中，按上述实验条件对sw1990细胞分组进行孵育培养，0.5 g/L胰酶消化贴壁生长的细胞进行传代［5］。

1.3 观测指标

1.3.1 细胞增殖抑制率检测 采用MTT法检测。胰酶消化后收集细胞，每组细胞以104个/孔接种于96孔培养板中。细胞覆盖率达70% ～80%后吸出培养基。每孔加入MTT溶液(5 g/L溶于PBS)20 μL，37℃孵育4 h。吸弃上清液，每孔加DMSO 150 μL振荡10 min，使蓝色结晶充分溶解，于酶联免疫检测仪上在490 nm波长处测定吸光度(A)，计算细胞增殖抑制率。抑制率=(对照孔A－实验孔A)/(对照孔A－空白孔A)×100%。

1.3.2 p53、bax及 pten mRNA 检测 采用 RT-PCR法。分别收集各组细胞，按……