RP-HPLC法测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的含量

2011-06-18王婷，于雪，李飞

实用药物与临床 2011年6期

王婷，于雪，李飞

参芪肝康胶囊是由茵陈、党参、水飞蓟、五味子、当归、黄芪6味药材与刺五加浸膏组成的复方中药制剂，具有祛湿清热，调和肝脾之功效。临床适用于湿热内蕴与肝脾不和所致的急、慢性肝炎［1］。其中水飞蓟已成为目前世界性的保肝植物，以其为主药的制剂已广泛用于治疗急慢性肝炎及肝硬变等。水飞蓟素为保肝的主要活性成分，具有抗氧化、降血脂、清热解毒和疏肝利胆的作用，其中活性最强的是水飞蓟宾［2］。因此，制剂中水飞蓟宾的含量测定对该制剂的质量控制具有重要意义。参芪肝康胶囊现行质量标准［1］中含量测定项下，采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸的含量。为提高其质量标准，全面有效地控制参芪肝康胶囊的质量，本文建立了测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾含量的HPLC方法。

1 仪器与试剂

LC-10ATvp-UV高效液相色谱仪，ANASTAR色谱数据处理系统，BS110S电子分析天平(Sartorius)。参芪肝康胶囊(编号 01、02、03)，规格:10 g/袋(自制)。水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯;水为重蒸水(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱Diamonsil C18(200mm × 4.6mm，5μm，迪玛公司);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸(48∶52，v/v);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:287 nm;理论板数按水飞蓟宾计算不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取水飞蓟宾对照品适量，置100mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.2 mg/mL的水飞蓟宾对照品储备液。精密量取水飞蓟宾储备液0.4mL，置10mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为48μg/mL的水飞蓟宾对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取七味药粉末，按制剂工艺制备［1］，研细，精密称定0.1 g，加水10mL，用乙醚萃取3次，每次10mL，合并乙醚萃取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至2mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备按处方制备不含水飞蓟药材的样品，照“2.3”项下方法制成阴性溶液。

2.3 测定法分别精密吸取“2.2”项下的3种溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测量峰面积，按外标法计算，即得。见图1。

2.4 线性关系考察精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 和 2.0mL，分别置 10mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以峰面积(Y)对其浓度(X)进行线性回归，水飞蓟宾的回归方程和线性范围:Y=9.062 ×103X- 1.352×104，r=0.9997(12.0～240μg/mL)

图1 色谱图

2.5 精密度实验取“2.2.2”项下的同一供试品溶液连续进样，测定6次，每次进样10μL，记录峰面积，水飞蓟宾的RSD为0.6%。结果表明，本方法精密度较好。

2.6 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h 测定峰面积值，计算含量。结果表明，样品室温放置24 h稳定，水飞蓟宾含量的RSD为1.3%。

2.7 重复性实验称取同一批号的参芪肝康胶囊(编号:01)6份，按“2.2.2”项下方法操作，制备供试品溶液。依次进样，以色谱峰面积按外标法计算。水飞蓟宾平均含量为1.143 mg/g，RSD为1.9%。表明本方法重现性较好。

2.8 加样回收率实验称取已知含量的同一批参芪肝康胶囊(编号:01)9份，精密称定，每份0.05 g，分别精密量取混合对照品储备液0.025、0.050、0.075mL，照“2.2.2”项下方法操作，所得供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。水飞蓟宾的方法回收率为97.0%，RSD为1.9%，结果见表1。

2.9 供试品的含量测定取3批样品，照“2.2.2”项下方法操作，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算参芪肝康胶囊中水飞蓟宾含量。结果见表2。