白文婷

脑缺血再灌注后以神经元为主的坏死和细胞凋亡是缺血性脑损伤中重要的病理生理过程,其中细胞凋亡的重要作用越来越受到人们重视。导致细胞凋亡的通路有多条,其中Fas和FasL系统是细胞凋亡中最重要的途径之一[1,2]。巴曲酶是目前比较公认的治疗缺血性脑血管病的药物之一,本研究从基因表达角度观察巴曲酶对脑缺血再灌注损伤后Fas、FasL基因较表达水平的影响,为临床应用提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 动物模型的建立与分组 选用健康W ister大鼠40只,雌雄不拘,体质量200～250 g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供,并随机分为5组,即Ⅰ组为假手术组,Ⅱa组为等渗盐水缺血6 h组,Ⅱb为等渗盐水缺血6 h再灌注6 h组(分别于缺血后2 h予以腹腔注射0.9%生理盐水1 m l),Ⅲa组为巴曲酶缺血6 h组,Ⅲb组为巴曲酶缺血6 h再灌注6 h组[与生理盐水组同时间同途径注射巴曲酶注射液8 BU/kg(用生理盐水衡释为1 m l)],每组各8只。模型的建立参照Zez-Longe法[3,4]并改良,大鼠麻醉后分离结扎右侧颈总动脉、颈外动脉,颈内动脉放置动脉夹,在近动脉分叉处约5 mm剪一小口,用直径0.17 mm的尼龙线(头端膨大直径约为0.25mm)插入颈内动脉约(19.0±0.5)mm,遇阻即止,闭塞大鼠清醒后爬行时向左转圈或提尾时左前肢内收屈曲为入组标准。每组大鼠于规定时间点快速断头取脑,剥取右侧大脑额顶叶上部皮质,液氮中冻存。

1.2 RT-PCR法半定量Fas m RNA和FasLm RNA表达水平

1.2.1 总RNA提取 取上述样本放入1‰DEPC处理的研钵中充分研磨后,加入 1m l Trizol试剂(美国Invitrogen),按说明书提取组织的总RNA。在质量浓度为10 g/L的琼脂糖凝胶上电泳,检测RNA完整性。……