朱平生，王 兵，龙爱华

(1.河南中医学院肝病研究所，河南 郑州 450008;2.上海中医药大学肝病研究所，上海 201203)

胆总管结扎(BDL)模型是成熟的肝外胆汁瘀积模型[1]。本文参考国外文献[2]，建立大鼠肝外胆汁瘀积模型，对该模型形成过程中的肝、肾功能进行动态观察，分析探讨其特点，为进一步应用此模型开展药理学研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 动物

Wistar雄性大鼠50只，清洁级，体重200 g±20g，中国科学院上海实验动物中心，SCXK(沪)2006-0012，上海中医药大学实验动物中心饲养、造模和观察。

1.2 试剂

肝、肾功能试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.3 模型复制及动态观测

按数字表随机法将大鼠分为2组，模型组38只，假手术组12只，大鼠禁食不禁水12h后，腹部皮肤常规消毒，用2%戊巴比妥钠以2ml/kg体重剂量大鼠腹腔注射麻醉，沿腹正中线切开，暴露并游离胆总管，将胆总管远近端三段结扎，于远心端第2、3结扎线之间剪断胆总管并关腹。假手术组仅开腹并游离胆总管后关腹[2]。于大鼠胆总管结扎第3天及1周、2周分别随机取模型组5只、假手术组3只大鼠处死取材，于3周处死剩余大鼠取材，观测肝重、脾重、体重。

1.4 样品采集及处理

经2%戊巴比妥钠以2ml/kg体重剂量腹腔麻醉后，大鼠仰卧位固定，打开腹腔观察大体情况和肝、脾的色、质、形态、体积及腹水情况。经下腔静脉采血并分离血清备用，摘取肝、脾称重。

1.5 观察指标与方法

1.5.1 一般情况 体重、肝重、脾重等。

1.5.2 肝、肾功能 检测血清 AlB、GLO、TP、TBil、TBA、CHO、BUN、CRE 含量，ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性，按试剂盒说明方法测定。

1.6 统计学方法

计量资料用统计分析软件SPSS13.0中ANOVA程序进行单因素方差分析，两两比较采用q检验。

2 结果

2.1 一般状况

自造模开始观察至3周末，模型组死亡12只，死亡率为24%，动物在第1周内死亡较多，2～3周死亡减少。

表1显示，与假手术组比较模型组大鼠的体重都有不同程度的降低，肝重、脾重、肝指数、脾指数呈增高的动态变化。

2.2 肝肾功能的动态变化

表2～4显示，AlB含量在造模3d后即显著下降，随着造模时间的推移呈梯级进行性降低;GLO、TP含量造模3d后先增高并持续在一个水平，于第3周开始下降;TBil含量和 GGT、ALP活性呈持续增高的动态变化，ALT活性和 TBA、CHO含量在造模3d后即显著增高，此后有所下降，至3周末仍高于假手术组(P<0.01，P<0.05)，AST在 3d后即显著增高并维持至3周末。LDH活性在造模1周时显著增高，其后有所下降;BUN含量在造模后前2周无明显改变，至第3周有所增高，CRE含量无统计学意义。

表1 大鼠一般情况各指标变化情况(s)

表1 大鼠一般情况各指标变化情况(s)

注:与各相同时相的假手术组比较:#P<0.05

组别 n 体重(g)肝重(g)脾重(g)肝指数(%)脾指数(‰)假手术组3天 3 247.33± 2.52 9.77±0.38 0.63±0.06 3.95±0.192.6±0.2假手术组1周 3 255.67± 4.04 10.40±1.22 0.67±0.06 4.07±0.48 2.6±0.2假手术组2周 3 295.67± 9.71 9.60±1.25 0.70±0.10 3.24±0.33 2.4±0.2假手术组3周 3 306.40±13.43 10.49±0.63 0.68±0.09 3.42±0.08 2.2±0.2模型组3天 5 203.60±29.69# 12.00±1.00# 1.16±0.13# 5.95±0.51# 5.8±0.9#模型组1周 5 190.00±34.00# 12.12±1.54# 1.28±0.64# 6.43±0.41# 6.6±2.4#模型组2周 5 218.40±10.43# 13.20±1.30# 1.34±0.13# 6.05±0.63# 6.1±0.6#模型组3周 11 210.17±23.60# 13.78±2.39# 1.55±0.41# 6.55±0.80# 7.4±1.9#

表2 大鼠血清AlB、GLO、TP、TBil含量变化表(s)

表2 大鼠血清AlB、GLO、TP、TBil含量变化表(s)

注:与假手术组比较:#P<0.05，*P<0.01;与模型其他时间点比较:△P<0.05

组 别 n ALB(g/L)GLO(g/L)TP(g/L)TBil(μmol/L)假手术组 12 32.72±1.29 24.29±3.24 57.01± 4.23 8.44±7.39 3天模型组1周2周3周29.02±4.36*29.70±0.60*27.92±3.57*22.93±1.62*△33.68±3.89#30.53±0.84#36.24±7.69#26.6±3.75#△62.70±7.62#60.23±0.40#64.16±11.13#49.53± 4.96#△81.32±8.47*83.00±10.43*92.36±15.00*141.87±53.20*△

3 讨论

胆管结扎形成的胆汁瘀积，在3周内模型大鼠肝脏重量逐渐增加，可能与造模后肝脏胆管上皮细胞增生有关。胆管结扎后大鼠血清白蛋白含量随着时间的推移呈进行性降低;球蛋白含量在造模后3d即有增高，是胆管结扎胆汁瘀积球蛋白反应性的增高，在第3周有所下降，与肝细胞的适应性有关;总蛋白先增高后降低的变化是由于造模后3d球蛋白的增高而增高，到第3周时随着球蛋白和白蛋白的下降而下降。血清胆红素在结扎后3d骤然增高，后持续缓慢增高，表明在肝细胞发生肿胀、变性、坏死到一定程度后，代偿失衡肝内的胆汁瘀积通过胆红素表现出来，并明显增高，随后在肝脏强大的代偿功能转化下，胆红素量反应钝化，与胆汁瘀积加重相关性不明显[3]。ALT及AST活性是监测肝炎的敏感指标，当肝脏发生炎症、坏死时，ALT、AST就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT、AST升高。本实验结果是ALT活性3d时最高，其后下降，可能与肝细胞通透性瞬间的增加相关;AST-直维持在较高水准上与肝细胞的细胞器损伤相关。血清ALP的增高程度与胆管阻塞的程度有关;GGT进行性增高主要表明胆管细胞的病变，亦有认为与肝纤维化的程度有关。在肝外胆汁瘀积时，肝脏产生的胆固醇过多，由于排泄障碍而反流入血液[4]，因此在胆管结扎3d时胆固醇增高，随着胆汁瘀积加重，肝实质细胞的减少，胆固醇酯化减少，血清内胆固醇比例可有所下降;而胆汁酸是在肝细胞微粒体内由胆固醇转变而来，与胆汁一起排泄入肠道，是肝脏清除体内胆固醇的主要方式，胆汁酸在造模3d的显著增高与胆固醇含量的增高有关，后由于胆固醇含量的降低，胆汁酸的量有所下降。

表3 大鼠血清酶ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性变化表(s)

表3 大鼠血清酶ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性变化表(s)

注:与假手术组比较:*P<0.01;与模型上一时间点比较:△P<0.05，▲P<0.01

组 别 n ALT(U/L)AST(U/L)LDH(U/L)ALP(U/L)GGT(U/L)假手术组 12 39.09± 5.49 218.49± 55.86 1134.57±301.05 109.56± 28.49 4.69± 0.51模型组3天 5 406.80±168.60*△ 777.74±271.95* 2204.18±456.72* 399.68±113.74* 19.44± 4.74*△1周 5 157.47± 81.83* 801.07±590.45*△ 2916.67±697.98*△ 325.47± 53.87*△ 40.53±24.57*2周 5 114.48± 48.16* 507.58±170.11* 1503.84±487.82▲ 287.34±108.66*△ 58.44±25.97*3周 11 172.40± 37.29* 709.90±226.90* 2169.96±434.10*△ 449.13±109.17*△ 144.67±32.19*△

表4 大鼠TBA、CHO、BUN、CRE含量变化表(s)

表4 大鼠TBA、CHO、BUN、CRE含量变化表(s)

注:与模型组比较:#P<0.05，*P<0.01;与模型上一时间点比较:△P<0.05，▲P<0.01

组 别 n TBA(μmol/L)CHO(mmol/L)BUN(mmol/L)CRE(μmol/L)假手术组 12 22.46±11.71* 1.37±0.15* 7.29±1.61#22.73±13.64 23.5±2.19模型组3d 5 362.74±150.89▲ 5.29±1.15△ 7.09±1.84 12.26± 5.06 1w 5 156.37± 29.92 2.86±0.49 6.35±2.85 20.07± 8.29 2w 5 155.66± 53.64 2.03±0.33 6.04±1.02 19.76±12.06 3w 11 255.77±112.79 3.18±2.02 10.98±3.59△

从以上研究可以看出，BDL模型组大鼠的肝肾功能显著异常，与假手术组比较，模型组TP、ALB含量显著降低(P<0.05)，TBil、TBA、CHO、BUN 含量，ALT、AST、LDH、ALP、GGT 活性显著增高(P<0.05，P<0.01)，说明肝外胆汁瘀积可明显损害肝肾功能。

[1]尹珊珊，王宝恩，王泰龄，等.胆管阻塞性肝纤维化模型的建立与改进[J].中华肝脏病杂志;2002，10(5):385-386.

[2]Yaping Liu，Jane Binz，Mary Jo Numerick，et al.Hepatoprotection by the farnesoid X receptor agonist GW4064 in rat models of intra-and extrahepatic cholestasis[J].J Clin Investigation，2003，112:1678-1687.

[3]刘钺，张朝明，郝玲，等.血清总胆红素、甘氨胆酸、甲胎蛋白、糖类抗原19-9与胆汁瘀滞相关性评价[J].国际放射医学核医学杂志，2006，30(2):107-109.

[4]姚光弼，范上达，廖家杰.临床肝脏病学[M].上海:上海科学技术出版社，2004.144.