金 杰，任素华，苗彦永

(1.河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450008;2.新乡市中心医院，河南 新乡 453000)

血管性痴呆(Vascular Dementia，VD)是由各种脑血管因素导致脑组织损害而引起的获得性智能损害综合征，是常见的老年期痴呆之一。目前，血管性痴呆的治疗尚无突破，中医药对本病的治疗具有一定优势。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

健康清洁SD大鼠48只，雌雄各半，体重200 g±20 g，由河南省动物研究中心提供，编号 SCXK(豫)2005-0001。按照随机数字表法随机分为4组:假手术组、模型组、杏丁组、丹红组+模型组+杏丁组组合称为手术组，每组12只，以3%苦味酸分别做体表标记。

1.2 造模及行为学观察

采用王蕊[1]改进的两血管阻断 +硝普钠降压法制作VD大鼠模型，应用避暗实验法[2]判定造模成功与否及大鼠用药后的学习记忆改善情况。避暗实验方法为:根据大鼠的嗜暗习性分设明暗两室，明室上方20cm处悬挂60W日光灯，在暗室的中后部分底部铜栅加40V的电压，两室之间设有直径为3cm的圆洞。实验时将大鼠背对洞口放入明室，同时启动计时器，动物放入明室至第1次进入暗室遭电击所需的时间为潜伏期，记录大鼠第1次进入暗室的时间(潜伏期)及5min内动物遭电击次数(错误次数)。于造模后和连续给药14d后分别进行行为学测试，记录大鼠第1次进入暗室的时间和5min内进入暗室的次数作为学习成绩，24h后再次进行测试作为记忆成绩，并对其进行智障评分(不进入者评为0分，两耳通过圆孔评为1分，前肢越过圆孔评为2分，全身进入者评为3分)。

1.3 给药方法及疗程

按成人临床等效量进行换算，丹红组采用腹腔注射丹红注射液(由菏泽步长药业有限公司提供，批号070965)，杏丁组注射杏丁注射液(由贵州益佰制药业有限公司提供，批号070811)，每天1次，1周称鼠重1次，并调整药物剂量，连续腹腔注射14d。

1.4 标本制备方法

1.4.1 NO测定 采用比色法，取血后注入试管中待凝固后用血清4℃3000r离心，取上清测定。所用测试盒由南京建成生物工程研究所提供，批号20080617。

1.4.2 ET-1测定 采用放射免疫法，取血后注入含7.5%EDTA二钠30ul和抑肽酶40 ul的试管中混匀，4℃3000r离心10min取上清测定。所用测试盒由北京普洱伟业生物科技有限公司提供，批号20080625。

1.4.3 AChE测定 采用比色法，称取左侧大脑脑组织重量加9倍生理盐水制成10%匀浆，3500r离心10min，取上清待测。所用测试盒由南京建成生物工程研究所提供，批号20080617。

1.5 统计学方法

采用SPSS13.0统计分析软件在Winxp系统下操作，对于该计量资料用(s)表示，2组间比较用t检验。

2 结果

2.1 VD模型大鼠行为学变化及丹红注射液对其学习记忆能力的影响

表1、2显示，造模前各组动物毛发光滑，反应良好，行动敏捷，造模后开始出现兴奋不安、短暂惊厥、呼吸减慢;术后早期出现毛发稀疏且无光泽，反应迟钝，运动减少，后肢呈“八字”，共济失调，爬行不稳，眼睑明显下垂，术后3d各组大鼠大部分活动增加(造模中动物死亡2只);给药后，异常的行为均有不同程度的缓解，如毛发、行动、较前均有改善，而模型组大鼠毛发干枯、呆滞及行为迟缓。

表1 各组大鼠造模后避暗试验学习记忆功能结果(s)

表1 各组大鼠造模后避暗试验学习记忆功能结果(s)

注:*与假手术组比较:P<0.05，**P<0.01

组 别n 学习功能 记忆功能潜伏期(s)错误次数(次)潜伏期(s)错误次数(次)智障评分假手术组 12 104.67±9.88 2.17±1.34 122.58±9.79 1.75±0.75 1.42±0.78手 术 组 34 43.44±12.62** 3.09±1.29* 42.22±12.11** 2.75±1.43* 1.97±0.80*

表2 各组大鼠给药后避暗试验学习记忆功能结果(s)

表2 各组大鼠给药后避暗试验学习记忆功能结果(s)

注:*与假手术组比较:P<0.05，**P<0.01;△与模型组比较:P<0.05，△△P<0.01;▲▲与杏丁组相比P<0.01

组 别 n 学习功能 记忆功能潜伏期(s)错误次数(次)潜伏期(s)错误次数(次)智障评分假手术组 12 106.83±11.39 2.08±0.79 115.00±13.82 1.58±0.67 0.50±0.67模 型 组 12 49.58±11.21** 3.17±1.40* 52.50± 9.60** 4.0 ±1.21** 1.75±0.75**杏 丁 组 11 60.09±11.61△ 2.00±0.89△ 69.27±15.50△△ 1.91±0.83△△ 0.64±0.81△△丹 红 组 11 74.45±10.88△△▲▲ 1.91±0.83△ 75.73± 7.76△△ 1.64±0.81△△ 0.82±0.75△△

2.2 丹红注射液对VD模型大鼠血清NO、ET-1及脑组织AChE含量的影响

表3 各组大鼠血清NO、ET-1及脑组织AChE含量的比较(s)

表3 各组大鼠血清NO、ET-1及脑组织AChE含量的比较(s)

注:*与假手术组比较:P<0.05，**P<0.01;△与模型组比较:P<0.05，△△P<0.01

组 别 n NO(μmol/l)ET-1(pg/ml)AChE(U/mgprot)12 13.517±1.78 94.493± 8.23 0.969±0.40模 型 组12 11.900±1.19* 152.282±14.47** 2.930±0.71**杏 丁 组11 13.936±1.62△△ 128.121±13.21△△ 1.427±0.36△△丹 红 组11 13.636±2.30△ 132.288±18.63△△ 1.841±0.82假手术组△△

3 讨论

NO和ET主要是由内皮细胞合成释放的具有代表性的舒张血管因子和收缩血管因子组成，广泛参与心脑血管的病理生理过程，二者的动态平衡对维持血管舒缩功能和血液流动性等具有重要意义[3～5]。

本实验结果表明，模型组较假手术组血中 NO含量明显降低，内皮素水平明显升高，提示脑缺血再灌注损伤诱发血管内皮功能紊乱，导致血管内皮细胞合成与分泌功能障碍，此时NO的合成、释放减少，其内皮保护作用和拮抗作用削弱，内皮素含量增加，使血管强烈收缩，脑组织血供减少，加速脑组织损伤过程。经过药物治疗后血清NO浓度增加，ET水平降低可能与丹红注射液使NO的合成、释放增加，内皮合成、释放内皮素减少从而改善内皮功能有关。

脑组织海马区乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)含量的持续降低，可能是VD发生、发展的重要原因之一。实验及临床研究表明，抗胆碱治疗方法对 VD有效，患者脑脊液中Ach水平显著下降，下降幅度与痴呆程度成正相关。

本实验结果表明，反复脑缺血再灌注所致血管性痴呆大鼠的学习记忆功能明显障碍，脑组织中乙酰胆碱含量升高。根据乙酰胆碱合成反应的质量作用规律，缺血缺氧时能够诱发胆碱能神经元变性坏死，导致神经元内 AChE释放，使组织中的可溶性AChE含量及活性升高，最终分解突触内的Ach，导致Ach水平进一步降低，加重学习记忆功能的损伤。从本研究结果看，在降低AchE方面，杏丁稍优于丹红，二者之间比较差异无显著性。但从总体改善记忆作用方面看，丹红组优于杏丁组，表明丹红改善记忆的机制可能不只降低AchE 1个环节，而是通过多重机理发挥作用。杏丁注射液主要成分为银杏总黄酮和双嘧达莫，具有扩张血管、改善脑缺血产生的症状和记忆功能障碍的作用。银杏叶制剂是目前国内外公认的治疗VD有效药物，故选为对照药物。丹红注射液主要成分为丹参和红花，功能活血化瘀、通脉舒络，主要用于瘀血闭阻所致的胸痹心痛、中风。现代药理研究表明，丹参水溶性成分为多酚羟基类化合物，具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改变血液黏滞性、改善微循环、抗氧化损伤、扩张血管等作用[7]。红花主要成分为黄酮类化合物，可明显改善脑缺血大鼠的行为障碍，缩小缺血区范围，对缺血性脑损伤有明显的保护作用[8]。两药合用可明显改善脑的有氧代谢，扩张血管，加速血流，使血流量增加而改善微循环，降低血液的黏滞性，增加氧运，减轻缺血再灌注损伤[9]。

[1]王蕊，杨秦飞，唐一鹏，等.大鼠拟“血管性痴呆”模型的改进[J].中国病理生理杂志，2000，16(10):914.

[2]徐叔云主编.药理实验方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社，1991.660.

[3]金惠铭，卢建，殷莲华.细胞分子病理生理学[M].郑州:郑州大学出版社，2002.225-230.

[4]陈修，陈维洲，曾贵云.心血管药理学[M].3版，北京:人民卫生出版社，2002.192-235.

[5]邵福愿，王宇卉.分子神经药理学[M].上海:上海科学技术出版社，2005.337-347.

[6]Tanaka K，Ogawa N，Asanuma M，Kondo Y，Nomura M.Relationship ween cholinergic dysfunction and discrimination learning disabilities in Wistar rats following chronic cerebral hypoperfusion[J].Brain Res，1996，729:55-65.

[7]中国医学科学院药物研究所中草药现代研究(第2卷)[J].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1996.472.

[8]戎惠珍.红花的化学成分及药理研究概况[J].江西中医学院学报，1997，9(4):45.

[9]肖志辉.速避凝联合丹参治疗顽固性不稳定型心绞痛疗效观察[J].中国医药导报，2007，4(3):69.