Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建
2011-06-08范志强韩乃君张锦霞白安斌黄红梅扈荣良吴健敏
高 博, 范志强,韩乃君,张 念,张锦霞,王 颖,白安斌,黄红梅,扈荣良, 吴健敏
(1. 广西大学, 南宁530005;2. 军事医学科学院军事兽医研究所, 长春 130122;3. 广西兽医研究所, 南宁 530001)
猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的严重危害世界养猪业的一类高度接触性传染病,因其危害巨大,国际兽医局(OIE)将其列为须报告的16种动物传染病之一[1,2]。CSFV属黄病毒科、瘟病毒属,基因组为单股正链RNA病毒,全长为12.3 kb,编码3989个氨基酸[3]。研究表明,编码370个氨基酸的E2囊膜糖蛋白是其主要的保护性抗原蛋白,可以诱导机体产生保护性免疫反应[4]。因此,新型猪瘟疫苗的研制主要是围绕E2蛋白展开的。
伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒的一员,可引起多种家畜和野生动物发热、奇痒和脑脊髓炎[5]。PRV病毒基因组为线性双链DNA分子,约150 kb。因PRV具有基因背景清楚,遗传稳定性强;含有许多病毒复制的非必需基因,外源基因容量大(30 kb);宿主范围广泛,且不感染人,安全性好等优点,因此本研究将其作为首选的病毒载体。
转座子(Transponson,Tn),又称易位子,是指存在于染色体DNA上可以自主复制和位移的一段DNA顺序。1951年,Barbara Mclintock 首先在玉米中发现了控制元件,后来被命名为转座元件或转座子[6]。转座子可以在不同复制子之间转移,以非正常重组方式从一个位点插入到另一个位点,对新位点基因的结构与表达产生多种遗传效应。本研究所用的Tn5转座子是一种细菌的转座子,两端分别带有转座元件IS50R和IS50L ,可在Tn5转座酶催化下随机插入、整合到目标DNA序列中,同时带入两端转座元件以内的DNA 序列,从而使外源基因可以随机地插入靶基因[7]。……
