李红利，樊军浩

(漯河职业技术学院，河南漯河462002)

氨基酸缩合成肽反应是生命起源过程中的基本单元反应，而磷试剂在这一过程中起着举足轻重的作用［1－4］，研究磷试剂辅助下氨基酸缩合成肽的反应与揭示生命起源以及生命活动中的化学机制，并从生命起源的化学特定角度阐明生命现象的本质有着重要的学术价值和理论意义。本文以L-酪氨酸(LTry)为研究对象，以无机磷试剂三氯氧磷(POCl3)为缩合试剂，利用高效液相色谱法(HPLC)、液质联用(LC-MS)以及多级质谱(MS/MS)技术对其自组装反应体系进行了研究，考察了在磷缩合试剂作用下酪氨酸成肽的类型及质谱裂解规律。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

Bruker ESQUIRE-3000高效液相色谱-电喷雾-离子阱多级质谱仪(美国Bruker公司);Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)和依利特P230高效液相色谱仪(大连依利特公司)。

三氯氧磷为天津市化学试剂一厂生产;L-酪氨酸购于华美生物工程公司;溶剂二氧六环为天津市光复精细化工研究所生产。试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件

色谱柱:Zorbox C18(150 mm×2.1 mm，5 μm);流动相:流动相A为0.05%三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈;梯度洗脱设置为10 min内由20%溶剂B线形增加至50%再在10 min增加至60%，再在10 min增加至80%。检测波长:254 nm;流速:0.8 ml/min;每次进样10 μL。

1.3 质谱条件

喷雾电压为4000 V，毛细管温度:300℃，喷雾气(N2):7 psi，干燥气(N2)流速为4 L/min，温度为300℃。扫描范围为15～900 m/z，Target:200 m/z。

1.4 液相色谱-质谱联用条件

正离子检测模式，喷雾电压为4000 V，毛细管温度为350℃，喷雾气(N2):20 psi;干燥气(N2):8 L/min，扫描范围:15 ～900 m/z，Target:200 m/z。

1.5 实验方法

分别取50 mmol(0.90595 g)酪氨酸与含50 mmol三氯氧磷(4.6 ml)的50 ml二氧六环(50 ml)溶液混合。每天取20 μL反应液，用180 μL水终止反应，再用流动相(30%的已睛和70%的0.05%的三氟乙酸)400 μL稀释。……