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NF-κB抑制剂PDTC对小鼠肝癌细胞生长的影响

2011-06-01何顺亮周海华余文娟宋瑞祥施广霞郭连英

大连医科大学学报 2011年4期
关键词:小鼠实验检测

何顺亮,司 敏,周海华,余文娟,宋瑞祥,施广霞,郭连英,郝 冰

(大连医科大学 1.临床医学七年制2006级,2.临床医学2007级,3.病理生理教研室,辽宁 大连 116044)

核转录因子NF-κB是首先由Sen、Baltimore、Mercurio等,在1986年从成熟B 淋巴细胞和浆细胞核的抽提物中发现的核蛋白因子,因能与免疫球蛋白的κ轻链基因内含增强子的特异性序列(即κB序列,10bP : 5’-GGGACTTTCC-3’)特异结合并促进κ链基因表达而被称为核因子κB ( nuclear factor - κB,NF -κB)[1,2],该因子是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族,包括Rel ( c - Rel) ,RelA(p65) ,RelB,NF -κB1 (p50)和NF -κB2 (p52、p49、p50B)。NF -κB是真核生物中广泛存在的一种多向性、多功能的核转录因子,可调控细胞凋亡、增殖的相关基因,在细胞癌变过程中发挥重要作用。抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (Pyrro1idine dithiocarbamate ,PDTC) 是NF-κB的特异性抑制剂,PDTC可抑制淋巴瘤、乳腺癌和卵巢癌等肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制促炎性因子的分泌[3-5]。本实验用体外细胞培养和体内抑瘤实验研究PDTC 对小鼠腹水型肝癌Hca-F的抗肿瘤作用。

1 材料和方法

1.1 动 物

Balb/c小鼠,无特定病原体, 雌雄各半,共20只,体重雌鼠18~32 g,雄鼠27~39 g。

1.2 药品、试剂与器材

PDTC购于sigma公司; MTT购于Amresco公司,生产批号:0793;DMSO购于天津市光复精细化工研究所,生产批号:060831,丙二醛(Maleic Dialdehyde MDA)试剂盒购于南京建成生物工程研究所。低温高速离心机(EVOLUTION TMKC,美国),酶标仪(BIO-RADmodel550,日本)。

1.3 肿瘤细胞株

小鼠Hca-F细胞株为源自小鼠肝癌细胞H22的高淋巴道转移亚系,常规传代保种。

1.4 体外实验

1.4.1 实验方法[6]:(1) 标本处理:无菌条件下取小鼠腹水0.1 mL加于预盛有PBS缓冲液3 mL的离心管中,离心弃上清,用PBS缓冲液2 mL冲洗后离心3遍,加含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基(1640全培基,下同)吹打成细胞悬液,计数并调浓度至1×106细胞/mL。……

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