董海影 兴桂华 张晓杰

(齐齐哈尔医学院医学技术学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

抑郁症是一种包括多种精神症状和躯体症状的复杂的情感性精神障碍，其发病率和自杀率高，危害性大〔1〕。研究发现，大脑增龄性变化是神经系统退行性疾病的最初级阶段变化〔2〕。因此，对于大脑中枢神经系统增龄性变化的研究可以作为多种神经系统疾病的研究基础，为防治神经退行性疾病提供新的思路。本实验从行为学和生化两个方面对不同年龄组大鼠抑郁症动物模型进行评价，旨在分析年龄的增长与抑郁症发生、发展的相关性，为探讨抑郁症的发病机制和防治抑郁症提供理论基础和实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物与试剂 SD雄性大鼠60只:幼年(4～5周龄)组20只，体重90～110 g;成年(4～5个月龄)组20只，体重360～380 g;中年(14～15个月龄)组20只，体重600～620 g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号:SCXK(京)2007-0001。单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮/肾上腺酮(CORT)试剂盒(ADL，美国)。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠在自然昼夜节律光照、室温18℃ ～20℃、无噪音环境下，适应性生活1 w后称重，开野法(Open-Field)评分，每个年龄组随机分为对照组和模型组各10只。

1.2.2 造模 模型组单笼饲养，进行21 d慢性轻度不可预见性应激刺激(chronic mild unpredictable stress，CMUS)〔1，2〕:电击足底(电流强度 1 mA，电压 45 mV，10s/次，间隔 1 min，共 30次)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、摇晃(1 次/s，15 min)、夹尾(3 min)、热应激(45℃，5 min)、禁食(24 h)、禁水(24 h)、昼夜颠倒、束缚(8 h)、倾斜鼠笼与潮湿垫料(100 g垫料中加入200 ml水)。每日给予1种刺激，顺序随机。

1.2.3 Open-Field 评分实验装置为高40 cm、底边长80 cm、周壁涂黑、底板为白色的无盖方箱，底板用黑线划成16 cm×16 cm的25个方格。实验在安静环境下进行，将大鼠轻放于方箱底板中心，每只动物单独测定，每次测定时间为3 min，两只动物之间用体积分数为10%的酒精清洗方箱周壁及底板，以免上次动物余留的异味影响下次实验结果。计分方法:以大鼠穿越底面格数为水平活动得分，大鼠4只脚均在同一格子内为一格，穿越一格计1分，如大鼠沿线行走，以每10 cm为1分;以大鼠直立次数为垂直活动得分，双足离开底面为标志。两项之和为敞箱实验总得分。

1.2.4 糖水消耗量实验 造模前，大鼠进行1%蔗糖水摄取训练，即每笼同时放置2个水瓶，第一个24 h，2瓶均装有1%蔗糖水;随后的24 h，1个瓶装有1%蔗糖水，1个瓶装纯净水。1%蔗糖水消耗量:24 h禁食禁水后，测定1 h动物饮用1%蔗糖水和纯水的量，以摄入溶液的量(mg)/动物体重(g)和糖水偏爱(糖水偏爱=糖水消耗/总液体消耗×100%)进行评定。

1.2.5 指标检测

1.2.5.1 CRH、ACTH、CORT含量测定 行为学测试后，经大鼠眼静脉采血，静置4 h，4℃离心分离血清(1 500 r/min，10 min)，采用ELISA试剂盒测定各激素含量。

1.2.5.2 MAO活性的测定 断头处死大鼠，冰上分离出海马，按照重量和体积比1∶9的比例，加入预冷的生理盐水，在冰浴中制成10%的组织匀浆，4℃离心分离上清(3 500 r/min，10 min)，按试剂盒说明测定MAO活性，同时测定组织蛋白含量。

1.3 统计学分析 所有数据运用SPSS13.0统计软件进行处理，数据以x±s表示。

2 结果

2.1 年龄对抑郁症模型大鼠行为学指标的影响 见表1。

2.2 年龄对抑郁症模型大鼠生化指标的影响 见表2。

表1 各组大鼠应激前后Open-Field行为测定和液体消耗实验比较(x ± s，n=10)

表2 各组大鼠海马区MAO活性和血清CRH、ACTH、CORT含量的比较(x±s)

3 讨论

3.1 抑郁症模型行为学指标评价 CMUS抑郁症模型理论依据与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源导致抑郁症的发生并加速抑郁症发展的机制更接近，CMUS引起的行为改变能够持续数周甚至数月被观察到，且经典的抗抑郁治疗对之有效，故作为抑郁模型具有较高的价值，常用于抑郁症病理生理机制的研究及抗抑郁药物的筛选〔3〕。CMUS抑郁症模型模拟了抑郁症的核心症状——快感缺乏以及社会活动能力和探索行为能力下降等症状。糖水消耗实验和敞箱实验是检测模型成功与否的有效客观指标。糖水消耗量反映动物的奖赏反应程度，水平活动反映动物的活动度，垂直活动反映大鼠探究行为和好奇程度。本实验采用CMUS和孤养两种经典模型结合的造模方式，利用孤养模拟人类失去社会和家庭支持的孤独状态，长期轻度不可预见应激模拟抑郁症发病的压力源，造成孤养动物的抑郁状态。模型组动物经21 d慢性综合应激后水平穿越格数减少，直立次数减少，糖水消耗量和糖水偏爱度降低，表现出抑郁症患者具有的精神运动迟滞、兴趣丧失、快感缺乏的特征。三个年龄段的大鼠模型组比较，随着年龄的增长，抑郁症模型大鼠的行为学指标变化更加显著。

3.2 抑郁症模型生化指标评价 Schildkraut和Bunney提出的中枢5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine，5-HT)和去甲肾上腺素能(noradrenaline，NE)低下假说是抑郁症发病机制的经典学说。MAO是5-HT和单胺类神经递质的主要代谢酶，MAO活性升高会导致突触间隙二者含量的降低，引起抑郁〔4〕。并且经过多方研究证明〔5～7〕，抑郁症时下丘脑-垂体-肾上腺轴 (hy-Pothalamus-pitutary-adrenal gland，HPA)功能亢进。本实验中模型组较对照组MAO活性均升高，CRH、ACTH、CORT含量均升高，中年模型组较其余两个模型组 MAO活性均升高，CRH、ACTH、CORT含量均升高，说明相同刺激强度下，随着年龄的增长，抑郁症模型大鼠的生化指标变化亦更加明显。

1 Kessler RC，Berglund P，Demler O，et al.The epidemiology of major depressive disorder:results from the National Comorbidity Survey Replication(NCS-R)〔J〕.JAMA，2003;289(23):3095-105.

2 Oda Y.Choine acetyltransferase:the structure，distribution and pathologic changes in the central nervous system〔J〕.Pathol Int，1999;49(11):921-37.

3 李晓秋，许 晶.抑郁动物模型的研究进展〔J〕.中华精神科杂志，2002;35(3):184-5.

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5 Pitchot W，Herrera C，Ansseau M.HPA axis dysfunction in major depression:relationship to5-HT(1A)receptor activity〔J〕.Neuropsychobiology，2001;44(2):74-7.

6 Hauger RL，Shelat SG，Redei EE，et al.Decreased corticotropin-releasing factor receptor expression and adrenocorticotropic hormone responsiveness in anterior pituitarys cells of Wistar-Kyoto rats〔J〕.J Neuroendocrinol，2002;14(2):126-34.

7 曹碧茵，施建蓉.心理应激动物模型的研制及其应用〔J〕.中国行为医学科学，2005;14(2):191-2.