吴共发 胡洁 王雅娟 赵海燕 韩慧霞

1.南方医科大学基础医学院病理学系，广东 广州 510515；

2桂林市人民医院病理科，广西壮族自治区 桂林 514002

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，肿瘤侵袭、转移是患者死亡的主要原因。已有大量研究表明，上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在结直肠癌的侵袭、转移中发挥重要作用，能够发生侵袭转移的癌细胞的EMT特征往往较明显。但有文献报道，能发生远处转移的并不是EMT细胞而是非EMT细胞，EMT细胞只是负责降解细胞周围基质，为非EMT细胞的侵袭、转移开路，最终能在远处部位定植的是非EMT细胞［1］。本研究旨在探讨结直肠癌与其淋巴结转移癌组织及结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异，期望进一步了解EMT在结直肠癌侵袭、转移中的作用。

1 资料和方法

1.1 材料

浓缩型鼠抗人E-cadherin、vimentin单克隆抗体、即用型二步法(PV9000)免疫组化广谱检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉公司；RPMI1640培养基购自莱德尔生物公司；新生牛血清购自吉泰公司；TRIzol试剂购自南京凯基公司；Reverse transcription system试剂盒、SYBR Premix ExTaqTM试剂盒购自TaKaRa公司；E-cadherin、vimentin和GAPDH引物由上海英骏公司合成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

人结直肠癌细胞系SW480、SW620购自中国科学院上海生命科学研究院，采用含20%新生牛血清的RPMI1640培养基，37 ℃、CO2体积分数为5%的培养箱内培养。

1.2.2 Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系中E-cadherin和vimentin的mRNA表达

参照说明书，用 TRIzol试剂常规提取细胞总RNA。按照逆转录试剂盒操作程序进行逆转录反应。反应总体系为20 μL，其中样品总RNA 2 μL，5×Prime Script 4 μL，PrimeScript RT Enzyme MixⅠ1 μL，Random 6mers 1 μL，Oligo dT Primer 1 μL，DEPC水11 μL。37 ℃反应15 min，85 ℃灭活5 s。 看家基因GAPDH为内对照。通过荧光染料相对荧光定量PCR方法，同时对E-cadherin，vimentin和GAPDH进行检测，计算出不同样本的E-cadherin，vimentin的相对表达量。……