隋华 周利红 刘宣 殷佩浩 周宁 王炎 孙珏 范忠泽 李琦

上海中医药大学附属普陀医院肿瘤科，

上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所，上海 200062

多药耐药(multidrug resistance，MDR)是影响结直肠癌临床化疗疗效的重要原因之一，结直肠癌产生多药耐药的机制较为复杂，其中多药耐药基因MDR1编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)在结直肠癌多药耐药中起着重要作用［1］。COX-2是花生四稀酸转化为前列腺素过程中的一个关键限速酶，是肿瘤发生、发展的重要分子靶标之一。有研究表明，COX-2过表达与结直肠癌多药耐药密切相关，是结直肠癌多药耐药重要的促进因素，但其确切的机制尚不清楚［2-3］。本实验采用含COX-2基因的重组慢病毒载体和COX-2特异性抑制剂上调或抑制人结肠癌敏感细胞HCT8和多药耐药HCT8/V细胞COX-2的表达，研究COX-2对人结肠癌细胞的化疗药物敏感性、MDR1 mRNA和P-gp表达的影响，探讨COX-2对人结肠癌细胞多药耐药的影响和调控作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 细胞与试剂

人结肠癌细胞株HCT8及人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V由上海中医药大学附属普陀医院实验中心保存。载体质粒(pFU-GW)、pGCSIL-GFP质粒和293T细胞株购于上海博古生物公司；大肠埃希菌DH-5α为本实验室保存；限制性内切酶XbaⅠ、XhoⅠ、HpaⅠ、NotⅠ、T4 DNA连接酶、PrimeSTARTM HS DNA多聚酶均购自大连宝生物公司；脂质体LipofectamineTM2000购自美国Invitrogen公司；胶回收试剂盒、质粒抽提试剂盒购自天根生物公司。COX-2特异性的抑制剂NS-398购于美国Serologllcais公司；四甲基偶氮唑盐MTT购自美国Sigma公司；总RNA抽提试剂RNAiso Reagent、荧光定量PCR试剂购于日本TaKaRa公司；GAPDH和MDR1上下游引物和探针由上海闪晶生物公司设计并合成。……