冯永钦,潘红玲,龙 梅

(枝江市人民医院,湖北枝江443200)

现将本院2008-2009年所检出的220株鲍曼不动杆菌的临床分布分型及药敏结果情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

220株鲍曼不动杆菌分离于本院2008年1月-2009年12月期间住院患者送检的标本。标本包括痰液、血液、尿液、脓液、引流液、伤口分泌物、胸水和腹水等。

1.2 试剂

氨曲南,环丙沙星,头孢吡肟,亚胺培南,头孢他啶,哌拉西林,哌拉西林/他唑巴坦,庆大霉素药敏纸片均购自OXOID公司;随机引物 5′-GTTGGTGGCT-3′,PCR扩增试剂盒及细菌基因组DNA抽提试剂盒均购自上海生工公司,引物由上海生工公司合成。

1.3 培养鉴定

所有分离菌株的培养鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》,采用BD全自动微生物鉴定系统对所有收集的菌株进行菌种鉴定。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.4 RAPD分型 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型进行细菌同源性鉴定。

1.4.1 细菌DNA提取

用接种环挑取纯菌落接种于5 ml LB肉汤培养液,将装有LB培养液的试管置于震荡培养箱中,37℃,200 rpm/min,18-20小时培养至细菌生长对数期。然后取3 ml培养液,提取细菌基因组DNA模板置于-20℃保存备用。

1.4.2 RAPD基因分型

PCR反应体系参照上海生工公司Taq DNA Polymerase说明。PCR产物电泳分析:取5 μ L扩增产物与1 μ L 6×上样缓冲液混匀,点样于 1%琼脂糖凝胶,在120 V电压下电泳25 min,出现条带后,用凝胶成像系统观察。

2 结果

2.1 送检标本分布情况 220株鲍曼不动杆菌的分布情况是:痰液134株(61.0%)、伤口分泌物42株(19.0%)、尿液34株(15.6%)、其它临床标本占4.4%。科室分布主要为ICU,呼吸内科、烧伤科和感染科,具体见表1。

表1 铜绿假单胞菌临床分离株临床分布情况