王文军,温江涛

(连云港市第二人民医院检验科,江苏连云港222001)

本研究以Th17细胞为研究对象,对40例原发性干燥综合征(pSS)患者及40例正常对照组外周血Thl7细胞进行检测,并分析其与免疫指标及唇腺病理分级的相关性,以探讨其在pSS发病机制中的作用以及临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 pSS患者为2008年1月至2009年10月连云港市第二人民医院风湿科住院的患者,诊断标准为2002年原发性干燥综合症国际分类(诊断)标准[1]。共收集到pSS患者40例,其中女性35例,男性5例 ,年龄 17-75岁 ,平均(49±13)岁 ;病程10个月-9年,平均(4±5)年。正常对照组40名,为我院体检中心健康体检者,无自免疾病病家族史,其中女性35名,男性5名,年龄18-67岁,平均(48±15)岁。

1.2 主要仪器和试剂 荧光素标记的抗体:藻红蛋白(PE)标记抗人IL-17及同型对照购自eBioscience公司;佛波酯(PMA)、离子霉素(Ion)购自 sigmaaldrich公司;免疫磁珠阴选试剂盒购自美天旎(Miltenyi Biotec)公司、固定与透膜试剂盒购自Beckman Coulter公司;淋巴细胞分离液(Ficoll)购自加拿大CEDARLANE Laboratories Limited 公司;RPMI 1640、胎牛血清(FBS)购自Gibco公司;抗核抗体(ANA)检测试剂盒、抗SSA抗体、抗SSB抗体免疫印迹检测试剂盒(Euroimmun公司产品);C3、C4试剂盒(Beckman Coulter公司)。Beckman Coulter Epics XL流式细胞仪,Olympus BX50荧光显微镜,Beckman Coulter Immage特定蛋白分析仪。

1.3 Thl7细胞检测 用Ficoll液分离外周血单个核细胞(PBMC),依据免疫磁珠阴选试剂盒操作说明分选出CD4+T细胞,用含10%FBS的1640培养液重悬细胞(终浓度为1×106/ml),分别加入PMA 50 ng/ml、Ion 1 μ g/ml及阻断剂奠能霉素,在 37℃,5%CO2条件下培养5 h,然后取细胞悬液加入100 μ l固定剂A,避光反应15min,冷PBS洗涤1次,再加入透膜剂B100 μ l,反应 5 min,加入 10 μ l PE 标记的抗人 IL-17抗体,设同型对照反应管,避光反应30 min后,PBS洗涤2次,以 500 μ l冷 PBS重悬,进行流式细胞仪(FCM)测定,结果用system Ⅱ软件分析。

1.4 抗SSA抗体、抗SSB抗体采用免疫印迹法测定 C3、C4测定采用免疫散射比浊法;抗ANA采用免疫荧光法测定。

1.5 统计分析 采用SPSS16.0统计分析软件包分析数据,两组间均数比较采用t检验,变量间的相关性应用直线相关分析,P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 pSS组与健康对照组外周血Th17细胞表达水平 pSS组Th17细胞水平为(2.14±0.91),健康对照组为(0.56±0.21),pSS组显著高于健康对照组(P＜0.01)。

2.2 pSS患者外周血Th17细胞表达与血清抗SSA、抗SSB、ANA、C3、C4相关性 对pSS患者Th17细胞表达水平分别与血清ANA滴度、抗SSA、抗SSB、C3、C4含量进行直线相关分析,结果与相关免疫指标均与无相关性(P＞0.05),见表1。

表1 pSS患者外周血Th17细胞表达水平与疾病相关参数相关分析

2.3 唇腺病理分级对Th17细胞水平的影响 患者均进行下唇唇腺病理活检,根据唇腺活检病理分级标准,将唇腺病理变化分为1-4级。本组40例患者唇腺病理结果为1级1例,2级9例,3级16例,4级14例(见表2)。比较不同唇腺病理分级患者的Th17细胞水平,发现各组之间差异无统计学意义。

表2 pSS患者不同唇腺病理分级与外周血Th17细胞表达水平的比较

3 讨论

大量研究证实TH17细胞与自身免疫疾病之间的关键纽带即为 IL-17因子。在类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化症(MS)、哮喘等疾病中IL-17的表达均增加。其中,IL-17在类风湿性关节炎中的研究最为深入。早期认为IL-17作为一类促炎因子的在RA中仅仅是起到加强炎症作用。然而,近来有关人、鼠关节移植的研究提示IL-17自身能够刺激炎症反应的发生[2],并且引发一系列后续的病理反应。最近研究还发现RA患者关节滑液中IL-17的含量明显高于骨性关节炎患者滑液中的IL-17含量[3]。因此Th17细胞很可能在自身免疫反应的发生和发展中起重要作用。

pSS是一种以侵犯泪腺、唾液腺为主的自身免疫性疾病,它不仅侵犯外分泌腺体,还可侵犯全身多个器官,产生多种多样的临床表现。目前认为该病病因及发病机制尚不明确。本研究对临床40例pSS患者检测结果表明,其外周血Th17细胞表达水平显著升高,与健康对照组比较存在显著差异(P＜0.01)。同时本研究还分析了pSS患者外周血Th17细胞表达水平与血清抗SSA、抗SSB、ANA滴度、C3、C4含量进行直线相关分析,结果表明Th17细胞水平与疾病相关参数无相关性(P＞0.05)。本研究还将Th17细胞水平与唇腺病理进行了相关分析,结果表明两者之间并无显著性相关。虽然Th17细胞异常增加与pSS诸多临床参数之间无统计学相关性,但我们认为Th17细胞异常增加对pSS的发生、发展有调控作用。活化的Th17细胞通过分泌IL-17,IL-21、IL-6等因子发挥其促炎功能,而pSS发病的主要特点就是通过炎症作用损伤靶器官。因此在pSS的炎症过程中TH17细胞必然起到重要作用。但是pSS发病机制非常复杂,牵涉炎症因子网络非常庞大,而Th17细胞增多只是其中的一个环节[4,5]。同时本研究所涉及炎症因子及临床参数较少,所以Th17细胞究竟通过什么样的机制参与pSS的发病需进一步探索。

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