武慧丽，赵永青，侯亚红，王雪莲

(1.武警医学院附属医院神经科，天津 300162;2.武警海南总队医院，海口 570100)

缺血后适应(ischemic postconditioning，IP)是Zhao ZQ等在研究缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)心肌的保护过程中发现并提出的，因此将其定义为在心肌长期缺血之后，再灌注开始时，经历的短暂、重复缺血再灌注，从而起到保护缺血心肌的现象[1]。IP作为缺氧耐受现象的一种，与缺血预适应一样可以明显减轻脑I/R损伤，明显缩小脑梗死的体积，减轻迟发性的神经元的凋亡，明显改善缺血后的神经功能[2]。近年研究表明，丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)信号转导通路介导脑I/R损伤的细胞凋亡过程[3]，而p38是该信号转导通路中的关键成员之一，故本研究拟观察IP对大鼠脑I/R损伤后凋亡细胞数目、p38蛋白表达的影响，探讨IP对脑I/R损伤的保护作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

p38单克隆抗体为Santa Cruz公司产品，辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠IgG购自鼎国生物制品公司，Western blot检测试剂盒，小鼠抗大鼠β-actin抗体、BCA试剂盒、原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)法细胞凋亡检测试验盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 实验动物及分组

雄性SD大鼠30只，体质量250～300g，由武警医学院实验动物中心提供。动物随机分为3组(n=10):假手术组(sham组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)和缺血后适应组(IP组)。

1.3 实验方法

用Longa法[4]制作大鼠局灶性脑I/R模型:大鼠称重，10%水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉，暴露右颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，在颈外动脉距其始端约2 mm处做一小切口，将3-0号尼龙线一端烤成小球形经切口处插入颈外动脉，再经颈内动脉至大脑中动脉始端，栓塞大脑中动脉，造成局灶性脑缺血，大鼠脑缺血90min后，拔出尼龙线，恢复脑组织供血。……