曹延萍，郝咏梅，刘青娟，王 建，李 航，段惠军△

(1.河北医科大学病理教研室，2.河北医科大学第二医院内分泌科，石家庄 050017;3.邯郸市第一医院急诊科，河北 邯郸 056002)

糖尿病肾组织损害是糖尿病(DM)最严重的微血管并发症之一，肾脏固有细胞过度凋亡导致的细胞增殖与凋亡关系的不平衡是肾脏功能恶化甚至衰竭的重要机制，内质网应激是近年来新发现的介导细胞凋亡的途径之一，并已证明在糖尿病脏器损害过程中普遍存在。本研究观察了内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)标志蛋白GRP78及其特有的凋亡途径Caspase-12的表达及其与肾脏固有细胞凋亡之间的关系，探讨ERS是否存在于糖尿病肾损害过程中以及相应的作用，为临床寻求防治糖尿病肾损害的有效方法提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

Wistar雄性大鼠由河北省实验动物中心提供。链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，Sigma公司)。小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体(武汉博士德生物工程公司)，兔抗GRP78单克隆抗体(NeoMarkers公司)，CASPASE-12单克隆抗体(abcam生物制品有限公司)，TUNEL试剂盒(Promega公司)

1.2 方法

1.2.1 动物模型及分组 选取体重 120～140g Wistar大鼠24只，随机分A组:右肾切除对照组(n=10);B组:糖尿病(DM)组(n=14)。所有大鼠均用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，行右肾切除术，2周后大鼠切口完全愈合。B组大鼠按65 mg/kg腹腔注射STZ(溶于0.1 mol/L枸椽酸缓冲液中，pH值4.5)，A组只注射相当体积的枸椽酸缓冲液，48 h后于大鼠尾尖取血。血糖仪测定血糖，并测尿糖。血糖≥16.7 mmol/L，尿糖+++～++++者确定为DM模型。实验期间动物自由进饮食，不使用胰岛素及其他降糖药物。

1.2.2 标本收集 DM模型建成后，每周测血糖1次，不符合标准者弃去;于成模8周称重后用代谢笼收集24h尿，乙醚麻醉，股动脉取血，分离血清，用于生化指标测定。……