王爱梅，汤 浩，宝东艳，于 利

(1.辽宁医学院生理学教研室，锦州 121001;2.中国医科大学生理学教研室，辽宁 沈阳 110001)

丹参注射液(salvia miltiorrhiza injection，SM)系由传统中药丹参提取制得，具有清除氧自由基、防止脂质过氧化、改善微循环等多种药理作用。研究表明，SM可有效抑制庆大霉素(gentamicin，GM)耳中毒后豚鼠耳蜗一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的表达，以减少NO的过量生成，从而拮抗GM的耳蜗毒性[1]。已知催化合成NO的NOS异构体有三种类型，即神经元型(neuronal NOS，nNOS/NOSⅠ)、诱导型(inducible NOS，iNOS/NOSⅡ)和内皮型(endothelial NOS，eNOS/NOSⅢ)，SM是否对这三型NOS的表达都有影响目前尚不清楚。为此，本研究通过免疫组织化学方法及显微图像分析技术，结合听脑干反应(auditory brainstem response，ABR)测试，观察SM 对GM耳中毒后豚鼠耳蜗NOS三型异构体表达的影响，以进一步探讨SM对GM耳毒性的防护机制。

1 材料与方法

1.1 材料

健康白毛红目豚鼠，耳廓反射正常，体重250～300g，雌雄不限，由中国医科大学第二临床学院动物室提供;丹参注射液购自上海中西制药有限公司;硫酸庆大霉素购自天津药业集团新郑股份有限公司;兔抗nNOS/NOSⅠ和抗eNOS/NOSⅢ抗体为Santa Cruz公司产品，兔抗iNOS/NOSⅡ抗体为Sigma公司产品;即用型SABC免疫组织化学染色试剂盒和DAB显色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.2 实验动物分组及耳毒模型制备

将豚鼠随机分成4组(n=10):对照组、GM组、SM组和GM+SM组。GM组每日腹腔注射硫酸庆大霉素100mg/kg;SM组每日腹腔注射丹参注射液6 g/kg;GM+SM组同时注射硫酸庆大霉素和丹参注射液;对照组则每日腹腔注射与GM等量的生理盐水2.5 ml/kg。四组皆连续用药10d。用药期间每天监测动物体重以调整药量。

1.3 ABR测试

各组动物于用药前及停药第2天分别测试ABR。……