李贤慧，张新昌，王 刚，刘海玲，夏时海

(武警医学院分子生物学教研室，天津 300162)

神经活性甾体(neuroactive steroids)是由胆固醇或其前体在相应酶的作用下，在神经系统原位合成或经血脑屏障进入神经系统发挥作用的外周甾体及其代谢衍生物的统称[1-2]。研究表明神经甾体可以通过基因效应和非基因效应调节神经元的功能，在中枢神经系统中可发挥广泛的生物学活性[3-4]，如参与神经细胞的生长发育、成熟衰老、情绪反应、记忆过程，还参与焦虑、抑郁、惊厥、癫痫等调节过程。近年来，神经活性甾体对神经系统的保护作用日益受到关注，对防治各种神经退行性疾病极具潜力[5]。别孕烯醇酮是重要的神经活性甾体之一，它能对抗缺血引起的γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)受体功能减低[6]，还能对抗外伤性和缺血性脑损伤引起的细胞凋亡[7]，为此我们利用N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)诱发新生小鼠脑皮质神经元损伤模型，探讨神经活性甾体别孕烯醇酮对脑皮质神经元的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和设备

DMEM/F12培养基为GIBCO公司产品;胎牛血清为Hyclone产品;Trizol试剂为Invitrogen产品;多聚赖氨酸(PLL)，胰蛋白酶(Trypsin)，N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)，别孕烯醇酮(allopregnanolone，Allo)均为 Sigma产品。兔多克隆 anti-Akt，anti-pAkt(Ser473)购自 Cell Signaling公司，兔多克隆Anticleaved caspase-3，Anti-cleaved caspase-9，Anti-cleaved PARP购自美国Abcam公司;小鼠抗α-tubulin单克隆抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology公司;HRP标记的羊抗鼠、羊抗兔二抗购自北京中山生物技术公司;凋亡DNA-Ladder提取试剂盒购自北京普利来基因技术有限公司;CO2细胞培养箱，美国Forma Scientific公司;倒置显微镜，德国Leica DMIL产品;Evergene凝胶成像分析系统，冷泉港公司。……