甲状腺素对大鼠胰岛β细胞功能的影响
2011-05-23房春燕韩慧蓉
王 琳,房春燕,康 白,韩慧蓉
(潍坊医学院,山东潍坊261052)
甲亢患者因甲状腺激素分泌增多,葡萄糖代谢异常,升糖作用加强而出现高血糖;其代谢旺盛,胰岛素(INS)分泌相对不足,血糖升高,还可造成胰岛β细胞形态与功能损伤,导致糖耐量异常[1]。2008年,我们观察了不同剂量甲状腺素(T4)连续灌胃后,大鼠血清INS、空腹血糖(FPG)及胰腺细胞凋亡相关因子bax、bcl-2蛋白表达情况。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 动物、仪器及试剂 健康、清洁级SD成年大鼠60只,雌雄各半,体质量(180±20)g,购于解放军第89医院动物养殖中心。主要仪器:H-7500型透射电子显微镜(日本日立);SN-695B型智能免疫γ计数仪(上海原子核研究所);UV-1700紫外分光光度计(日本岛津)。主要试剂:左旋甲状腺素钠(德国Merck公司);INS试剂盒(北京原子能医学科学院);SABC免疫组化试剂盒、抗胰岛素抗体、浓缩型DAB显色试剂盒(武汉博士德公司)。
1.2 实验方法 将大鼠随机分为对照组[生理盐水 10 ml/(kg·d)]、低剂量组[T4100 μg/(kg·d)]、高剂量组[T4600 μg/(kg·d)]各20 只,每日9:00灌胃给药,连续用药20 d。禁食24 h后,腹腔注射3%戊巴比妥麻醉大鼠,由颈动脉取血5 ml,室温静置20 min,1 500 r/min离心15 min,分离血清置-20℃冰箱中保存。分别用放射免疫分析法、葡萄糖酶法检测血清INS、FPG。处死大鼠后迅速打开腹腔,于胰腺尾部作横断面,取出胰尾组织,用刀片快速切成1 cm×1 cm×1 cm大小的组织块;用预冷的生理盐水冲洗后,马上置于Bouin's液中固定约24 h,将固定好的组织块进行脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片后,以免疫组化法染色,进行光镜样本制备。采用IpWin51C图像分析系统对染色阳性物质(棕黄色、棕褐色)行吸光光密度测定,以平均光密度值表示bax、bcl-2蛋白表达。……
